ITGAM和FcγRⅢA与系统性红斑狼疮发病相关性的分子流行病学研究

摘要

背景：
　　 系统性红斑狼疮是一种全身性自身免疫性疾病，病变常累及多系统多器官。患者最突出的表现是血清中出现大量多种自身抗体，导致免疫复合物沉积和补体激活，引起多个系统和器官的损害。依据目前已知SLE发病机制的主要通路，免疫复合物清除异常是SLE发生发展的重要原因。ITGAM和FcγRIIIA都属于免疫复合物通路，作为两种与免疫复合物清除相关的重要免疫分子，其功能异常可导致免疫复合物处理障碍。
　　 目的：
　　 （一）比较SLE患者和正常对照，SLE合并肾炎和未合并肾炎、活动期和稳定期SLE患者外周血单个核细胞ITGAM和FcγRIIIA mRNA水平及其蛋白表达差异，分析其与SLE疾病活动指数、临床及实验室特征的关联，并探讨二者表达水平之间的关联；
　　 （二）Meta分析ITGAM-R77H和FcγRIIIA-F158V基因多态性与SLE遗传易感性的关系，并分析其风险等位基因的剂量效应关系。
　　 方法：
　　 病例组来自安徽医科大学第一附属医院和附属省立医院的SLE患者60例。参照系统性红斑狼疮疾病活动性指数、SLE的诊断及分类标准量表自行设计调查表，收集患者的一般情况和临床资料，并进行SLEDAI评分。获得研究对象知情同意后，抽取外周静脉血。
　　 采用流式细胞术FITC、PE、PE-Cy5三染色法检测SLE患者和正常对照组外周血ITGAM和FcγRIIIA的蛋白表达水平，并探讨其临床意义；采用实时荧光定量PCR检测SLE患者和对照组PBMC中ITGAM及FcγRIIIA mRNA水平，并探讨其临床意义；计算机检索2009年1月以前Medline、Blackwell、Embase等数据库并配合手工查找ITGAM-R77H和FcγRIIIA-F158V基因多态性与SLE遗传易感性的关联研究的文献，由两位评价员分别对筛选的文献进行质量评价，纳入符合条件的研究进行Meta分析，并探讨其风险等位基因的剂量效应关系。
　　 采用SPSS 10.01进行统计学分析。经正态分布拟合优度检验，对患者组和对照组ITGAM和FcγRIIIA的表达差异采用t检验或Mann-Whitney秩和检验。
　　 结果：
　　 （一）SLE患者PBMC中ITGAM蛋白及mRNA水平变化及其临床意义
　　 1.SLE患者与正常对照、SLE合并肾炎和非肾炎、活动期和稳定期患者PBMC中ITGAM蛋白表达水平:
　　 与正常对照组相比，SLE患者中性粒/单核/T细胞ITGAM蛋白表达均显著降低；与SLE非肾炎组相比，SLE肾炎组中性粒细胞ITGAM蛋白表达显著降低；但SLE活动组与SLE稳定期组PBMC中ITGAM的蛋白表达差异无统计学意义。
　　 2.SLE患者PBMC中ITGAM蛋白表达与SLEDAI的相关性：
　　 SLE患者中性粒/单核/T细胞ITGAM蛋白表达与SLEDAI均无显著性关联。其中SLEDAI与患者中性粒细胞/单核细胞ITGAM蛋白表达呈正相关，与T细胞的表达负相关，但差异均无统计学意义。
　　 3.SLE患者PBMC中ITGAM蛋白表达与临床及实验室特征的关联：
　　 伴发浆膜炎、神经系统损害的SLE患者单核细胞ITGAM蛋白表达显著升高。伴发C3降低的SLE患者中性粒细胞ITGAM蛋白表达显著降低；伴发抗-RNP阳性、ESR增高的SLE患者单核细胞ITGAM蛋白水平显著升高。
　　 4.SLE患者PBMC中ITGAM mRNA水平的变化：
　　 与正常对照组相比，SLE患者组PBMC中ITGAM mRNA水平显著降低；SLE肾炎组与非肾炎组、活动期组与稳定期组PBMC中ITGAM mRNA水平间差异均无统计学意义.
　　 5.SLE患者PBMC中ITGAM mRNA水平与SLEDAI的相关性：
　　 SLE患者PBMC中ITGAM mRNA水平与SLEDAI呈显著正相关。
　　 6.SLE患者PBMC中ITGAM mRNA水平与临床及实验室特征的关联：
　　 伴发关节炎的SLE患者ITGAM mRNA水平显著升高。未发现ITGAM mRNA水平与实验室特征有显著关联。
　　 （二）SLE患者PBMC中FcγRIIIA 蛋白及mRNA水平变化及其临床意义
　　 1.SLE患者和正常对照之间，SLE合并肾炎和非肾炎，活动期组和稳定期组PBMC中FcγRIIIA 蛋白表达水平：
　　 与SLE非肾炎组相比，SLE肾炎组NK细胞FcγRIIIA蛋白表达显著升高；与SLE稳定期组相比，SLE活动组NK细胞FcγRIIIA蛋白表达显著升高；但与对照组相比，SLE患者NK及单核细胞FcγRIIIA蛋白表达无统计学差异。
　　 2.SLE患者PBMC中FcγRIIIA 蛋白表达与SLEDAI的相关性：
　　 SLE患者NK/单核细胞FcγRIIIA蛋白表达与SLEDAI呈负相关，但差异均无统计学意义。
　　 3.SLE患者PBMC中FcγRIIIA蛋白表达与临床及实验室特征的关联：
　　 伴发关节炎的SLE患者NK细胞FcγRIIIA蛋白水平显著降低，而伴发肌炎的SLE患者FcγRIIIA蛋白显著升高；伴发脱发、肾脏病变的SLE患者单核FcγRIIIA蛋白水平显著升高。伴发C3降低、白细胞减少的SLE患者NK细胞FcγRIIIA蛋白水平显著升高；伴发IgA 升高的SLE患者单核细胞FcγRIIIA蛋白水平显著降低。
　　 4.SLE患者PBMC中FcγRIIIA mRNA水平变化与正常对照组相比，SLE患者组PBMC中FcγRIIIA mRNA水平显著降低；与SLE非肾炎组相比，SLE肾炎组PBMC中FcγRIIIA mRNA水平显著降低；SLE活动期组与SLE稳定期组PBMC中FcγRIIIA mRNA水平间差异无统计学意义。
　　 5.SLE患者PBMC中FcγRIIIA mRNA水平与SLEDAI的相关性FcγRIIIA mRNA水平与SLEDAI呈负相关，但无统计学意义(r=-0.246，P>0.05)。
　　 6.SLE患者PBMC中FcγRIIIA mRNA水平与临床及实验室特征的关系伴发抗-SSB阳性、抗-RNP阳性、C3降低、IgG升高的SLE患者PBMC中FcγRIIIA mRNA水平显著降低；未发现FcγRIIIA mRNA水平与临床特征有显著关联。
　　 7.SLE患者PBMC中ITGAM和FcγRIIIA不同细胞表达水平之间的相关性分析SLE患者中性粒细胞ITGAM蛋白表达与其在单核细胞的表达呈显著正相关。单核细胞ITGAM蛋白表达与FcγRIIIA表达呈正相关，与NK细胞FcγRIIIA蛋白表达呈负相关，但均无统计学差异；中性粒细胞ITGAM蛋白表达与NK/单核细胞FcγRIIIA蛋白表达均呈负相关，但无统计学差异；T淋巴细胞ITGAM蛋白表达与NK、单核细胞FcγRIIIA蛋白表达呈负相关，但均无统计学差异。
　　 8.SLE患者PBMC中ITGAM和FcγRIIIA mRNA水平的相关性SLE患者FcγRIIIA mRNA与ITGAM mRNA水平呈负相关，但无统计学意义。
　　 （三）Meta分析：FcγRIIIA-F158V和ITGAM-R77H与SLE遗传易感性的关系
　　 1.FcγRIIIA-F158V与SLE遗传易感性的Meta分析：
　　 最终有17个研究纳入FcγRIIIA与SLE的Meta分析，包括3,493个SLE病人和2,426个对照，病人中1711个SLE肾炎和1782个SLE非肾炎，其中1855个欧洲裔，409个非洲裔，1229个亚洲裔。Meta分析分为三组比较：SLE vs.对照，SLE肾炎vs.SLE非肾炎，SLE非肾炎vs.对照。结果发现：在总人群中，158F等位基因与SLE的遗传易感性显著相关，并且纯合子FF基因型在SLE组呈现剂量效应关系。按种族分层发现，158F等位基因与欧洲和亚洲裔SLE显著相关，且纯合子FF基因型仅在亚洲人群SLE中呈现剂量效应关系；158F等位基因仅与亚洲人SLE合并肾炎组显著相关；纯合子FF基因型与亚洲裔、欧洲裔SLE较非洲裔SLE关联强。
　　 2.ITGAM-R77H与SLE遗传易感性的Meta分析：
　　 共纳入了5个GWAS研究，包括12123个病人和17106个对照，Meta分析结果发现：风险等位基因A与SLE的遗传易感性显著相关，纯合子AA vs GG。
　　 结论：
　　 （1）SLE患者PBMC中ITGAM mRNA及其蛋白表达均显著降低，且mRNA水平与SLEDAI呈显著正相关；SLE患者PBMC中FcγRIIIA蛋白水平无异常表达，但发现mRNA水平显著降低。SLE肾炎组FcγRIIIA蛋白显著升高但mRNA水平显著降低。不同临床特征及疾病活动度SLE患者ITGAM和FcγRIIIA表达有差异。
　　 （2）SLE患者中性粒与单核细胞ITGAM的表达呈显著正相关。患者FcγRIIIA与ITGAM mRNA水平及蛋白表达均呈负相关趋势，但无统计学意义。尚不能确定FcγRIIIA与ITGAM在SLE发病中有相加作用，还需进一步蛋白质组学研究。
　　 （3）ITGAM-R77H和FcγRIIIA-F158V与SLE的遗传易感性密切相关，且FcγRIIIA-158F呈剂量效应关系，158F等位基因与亚洲人狼疮肾炎显著相关。