甘草调和诸药的配伍机制及保肝作用研究

摘要

目的:本研究首先从分子水平上考察甘草中的主要单体成分甘草酸对人HepG2细胞中细胞色素P450 3A4酶在转录及蛋白水平表达的影响，并且对其诱导细胞色素P450 3A4酶的调控机制进行初步探讨。同时观察了甘草及甘草酸对石胆酸所致小鼠肝损伤的保护作用，为中药甘草调和诸药，保肝解毒的理论提供实验依据。
　　 方法: RT-PCR及Western-blot技术分别用于检测甘草酸对CYP3A4 mRNA及蛋白表达的影响；瞬时共转染荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移技术（EMSA）用于甘草酸对CYP3A4 诱导表达调控机制的研究；利用过量石胆酸造成小鼠肝脏损伤的病理模型观察甘草及甘草酸对肝脏损伤的保护作用。
　　 结果: RT-PCR结果显示，甘草酸能浓度和时间依赖性地使HepG2细胞中CYP3A4 mRNA的表达上调。同时，Western-blot结果显示，HepG2细胞在给予甘草酸后CYP3A4 蛋白的表达也呈浓度依赖性的升高，与mRNA水平变化相一致。报告基因和EMSA结果显示，甘草酸可通过直接激活PXR受体，进而诱导CYP3A4基因及蛋白表达的增加。整体动物实验的结果显示，甘草及甘草酸各剂量组能有效逆转LCA所致肝损伤小鼠外周血ALT及AST的升高，组织学检查发现，小鼠在给予甘草和甘草酸后，肝细胞的坏死程度得到明显改善，而甘草和甘草酸对LCA所致小鼠肝损伤的保护作用可能与其调控LCA合成及代谢的关键基因SHP，CYP7A1及CYP3A11的表达有关。
　　 结论:甘草酸具有对CYP3A4酶的诱导效应，可能产生基于药物代谢酶的草药-化学药之间的相互作用 (herb-drug interaction)；甘草调和诸药的配伍机制可能与其参与对细胞色素P450 3A4的诱导表达进而使与其同服的其它中药或中药复方中的毒性成分的代谢加速而起到缓和药性，进而达到调和诸药的目的，而对CYP3A4的诱导表达作用可能是通过甘草-PXR-CYP3A4核受体激活途径来发挥效应的。 同时利用过量石胆酸造成的肝损伤模型，为进一步探讨其保肝解毒的分子机制，研究甘草功能提供了很好的动物模型。