25二羟维生素D3联合塞莱昔布增强阿霉素对乳腺癌细胞株MCF/ADR的作用及与NF-κB的关系

摘要

目的：研究1,25二羟维生素D3[1a,25-DihydroxyvitaminD3;1,25-D]和塞莱昔布(celecoxib;CELE)影响阿霉素(doxorubicin;ADM)对乳腺癌细胞株MCF/ADR的作用及其作用机制与NF-κB的关系。
　　方法：采用四唑氮蓝比色(MTT)法检测1,25-D和CELE对MCF/ADR细胞的作用及ADM的半数药物抑制浓度(IC50);采用流式细胞技术分析1,25-D和CELE作用于乳腺癌细胞株MCF/ADR细胞后,对细胞凋亡和细胞内ADM累积的影响;罗丹明标记抗体检测1,25-D和CELE对MCF/ADR细胞膜表面P-糖蛋白表达的影响;免疫组化SP法检测1,25-D和CELE作用于MCF/ADR细胞后NF-κB/p65蛋白和IκBα蛋白的表达水平。
　　结果：
　　1.1,25-D和CELE对MCF/ADR细胞的作用
　　1,25-D和CELE抑制MCF/ADR细胞的增殖,且具有时间和浓度依赖性,两药联合使用时呈现协同抑制作用。
　　2.1,25-D和CELE增强ADM对MCF/ADR细胞的作用
　　①1,25-D(50nmol/L)和CELE(25umol/L)作用于MCF/ADR细胞后,ADM的IC50明显降低(P<0.01),1,25-D、CELE联合用药组与1,25-D或CELE单药组之间有统计学差异(P<0.01)。
　　②1,25-D联合CELE和ADM作用72h后MCF/ADR细胞的早期凋亡率显著提高,与1,25-D或CELE单药联合ADM组和单用ADM组凋亡率相比差异有显著统计学意义(P<0.01);
　　③1,25-D和CELE均降低了MCF/ADR细胞表面P170蛋白的表达,增加了细胞内ADM的浓度,两药联合作用强于1,25-D或CELE单药作用(P<0.01)。
　　3、1,25-D联合CELE对NF-κB活性的影响
　　免疫组化结果提示ADM促进P65蛋白的表达,抑制IkB-α的表达;与细胞对照组和ADM组相比,1,25-D联合CELE组的p65蛋白表达水平降低,IκBα的表达增高,抑制了ADM引起NF-κB的活化(P<0.05)。
　　结论：
　　1.1,25-D和CELE抑制MCF/ADR细胞增殖、促进了MCF/ADR细胞的凋亡,两者联合用药时较1,25-D或CELE单药效果更佳。
　　2.1,25-D联合CELE和ADM作用于MCF/ADR细胞后,降低了ADM的IC50和细胞表面P170蛋白的表达,细胞内ADM含量也较未加药物处理时明显升高,明显逆转该细胞株对ADM的耐药性。
　　3.1,25-D联合CELE增强ADM对乳腺癌耐药细胞的作用,可能机制为1,25-D和CELE抑制NF-κB的活化,促进细胞凋亡。

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英文摘要

1 前言

2、材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 细胞培养

2.1.2主要仪器

2.1.3 实验药品

2.1.4 试剂

2.1.5 分析软件

2.2 实验方法

2.2.1 1,25-D增殖实验：

2.2.2 CELE增殖实验：

2.2.3 MTT法检测1,25-D和CELE的相互作用性质

2.2.4 ADM的IC50的测定：

2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡率：

2.2.6 流式细胞仪检测细胞内ADM浓度：

2.2.8 免疫组化SP法检测细胞内P65蛋白和IκBα蛋白的表达：

2.3 统计处理

3、结果

3.1 1,25-D和CELE对细胞增殖的影响

3.3 1,25-D 联合CELE对 MCF/ADR细胞凋亡的影响

3.4 1,25-D 联合CELE对MCF/ADR细胞内ADM浓度的影响

3.5 1,25-D 联合CELE对MCF/ADR细胞表面Ｐ-170蛋白表达的影响

3.6 1,25-D 联合CELE对P65蛋白、IκB-α表达的影响

4 讨论

4.1 1, 25-D 和CELE对MCF/ADR细胞的作用

4.2 1,25-D 和CELE影响ADM对MCF/ADR细胞的作用

4.3 1,25-D3 联合CELE对MCF/ADR细胞内NF-κB活性的影响

5 结论

参考文献

个人简历

致谢

综述