自体成肌细胞对创伤性声门关闭不全恢复影响的实验研究

摘要

目的:观察兔喉返神经损伤并声带创伤、声带疤痕形成后,自体成肌细胞注射同侧甲杓肌内,探索自体成肌细胞对的创伤性声门关闭不全的疗效。
　　方法:分离成年大白兔胸锁乳突肌成肌细胞,进行体外培养、分离及扩增。对大白兔左侧颈部低位作一横切口,长约4cm。依次切开皮肤、皮下组织、分离颈前肌群,于甲状腺下极气管食管沟间找到喉返神经。于2-4气管环水平切除喉返神经1cm,近心端结扎并缝于皮下,同时取出左侧胸锁乳突肌(供细胞培养用)缝合切口。直达喉镜下,挑起会厌,暴露声门,细钩针于左侧声带表面划痕,深度超过上皮层到声带肌。建立左侧喉返神经切断、左侧声带创伤后声带疤痕形成伴声门关闭不全动物模型。20只大白兔随机分成2组,每组10只,实验用20只大白兔均予左侧喉返神经切断并且左侧声带创伤术。A组(成肌细胞直接注射组):左侧甲杓肌注射成肌细胞,右侧为正常对照。B组(盐水注射对照组):左侧甲杓肌注射生理盐水,右侧为正常对照。12周后分别观察自体双侧甲杓肌肌纤维直径和对应声带容积检查结果,以及对照组双侧甲杓肌肌纤维的直径及对侧声带容积的检查结果。
　　结果:自体成肌细胞甲杓肌注射12周后自体双侧甲杓肌肌纤维直径及声带容积大小无显著差异(p>0.05),注射生理盐水组和注射自体成肌细胞组甲杓肌肌纤维直径及声带容积大小有显著差异(p<0.05)。
　　结论:经甲杓肌注射自体成肌细胞后12周甲杓肌免疫组化染色镜下观察,见注射成肌细胞组甲杓肌肌纤维周围成肌细胞明显增多,这说明注射的成肌细胞已成活并已与宿主细胞很好的融合,并且使喉返神经损伤并同侧声带创伤、声带疤痕形成后声门关闭不全的甲杓肌直径增粗及声带容积增大,达到治疗声门关闭不全的目的。

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1． 前言

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 研究对象

2．1．2 实验动物

2．1．3 试剂

2．1．4 仪器

2.2 方法

2.2.2实验器材的准备

2.2.3接种前的消毒灭菌

2.2.4台盼蓝染色细胞计数方法：

2.2.5 细胞换液

2．2．6 喉返神经切断、声带创伤后声带疤痕形成伴声门关闭不全动物模型建立

2．2．7成肌细胞的原代培养

2．2．8 观察指标

3 结果

3．1 甲杓肌组织学观察

3．1．1 甲杓肌HE染色

3．1．2 甲杓肌免疫组化染色镜下观察

3.2 成肌细胞移植对声带容积的影响

3．2成肌细胞移植对甲杓肌纤维直径的影响

4讨论

5 结论

6 本实验不足之处：

7 进一步设想

参考文献

附录

致谢

综述