4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯诱导消化系统等肿瘤细胞分化的作用及对维甲酸受体和维甲类X受体的影响

摘要

目的:本研究观察新型维甲酸衍生物ATPR对对胃癌细胞株SGC-7901,肝癌细胞株BEL-7402、HEPG2,结肠癌细胞株HT-29,卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响和诱导分化活性,并探讨其作用的分子机制。
　　方法:
　　1.新型维甲酸类衍生物ATPR作用于肿瘤细胞株SGC-7901、BEL-7402、HEPG2、HT-29、SKOV3细胞后,通过MTT法检测细胞的增殖。吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化。分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶(γ-GT)活性;酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白(AFP),结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平和卵巢癌标志物糖链抗原125(CA125)。流式细胞仪测定细胞周期的变化。
　　2.采用RT-PCR法检测上述5种肿瘤细胞株维甲酸受体及维甲类X受体:RARα、RARβ、RARγ、RXRα的含量,比较其差异性。
　　3.将药物作用于肿瘤细胞72h,采用RT-PCR法检测用药后各肿瘤细胞中RARα、RARβ、RARγ、RXRα的转录水平的影响。
　　结果:
　　1.将ATPR作用于胃癌细胞株SGC-7901,肝癌细胞株BEL-7402、HEPG2,结肠癌细胞株HT-29,卵巢癌细胞株SKOV324h、48h、72h、96h后,抑制实体瘤细胞增殖作用呈剂量依赖性增加,明显抑制作用出现在药物作用48h,但在作用72h后则更显著。ATPR的诱导分化活性则表现在倒置显微镜下观察细胞趋于成熟分化。SGC-7901中ALP、LDH活性下降;BEL-7402、HEPG2中AFP、LDH、γ-GT水平下降;HT-29中CEA水平升高;SKOV3中CA125水平下降。流式细胞仪测定各肿瘤细胞G0/G1期细胞表达量增加,S期减少,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。
　　2.上述五种肿瘤细胞中RARβ的表达量极少,甚至缺失;RARα在BEL-7402和HEPG2细胞中表达量较高;RARγ在SGC-7901细胞中表达量较高;RXRα在SGC-7901、BEL-7402、HEPG2、SKOV3细胞中均有较高的表达,而在HT-29中表达含量相对较低。
　　3.ATPR作用72h后,SGC-7901中RARα、RARβ表达量升高,RARγ、RXRα表达量下降;BEL-7402和HEPG2中RARα表达量下降,RARβ、RARγ表达量升高;HT-29中RARα、RARβ、RARγ表达量升高;SKOV3中RARα表达量升高,RXRα表达量下降。
　　结论:
　　1.4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)有较强的抑制胃癌细胞株SGC-7901,肝癌细胞株BEL-7402、HEPG2,结肠癌细胞株HT-29,卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖并诱导其分化的活性,结肠癌细胞株HT-29的诱导分化活性有待于进一步研究。
　　2.维甲酸受体和维甲类受体在各肿瘤细胞中分布的不同,含量差异较大。这种分布差异反映了这些细胞接受维甲酸调控的能力及维甲酸受体不同亚型之间的比例不同,亦可能是肿瘤细胞对维甲酸及ATPR诱导分化敏感度不一的重要原因。3.受体RARα、RARβ、RARγ、RXRα可能与ATPR对胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制和分化作用有密切关系;受体RARα、RARβ、RARγ可能与ATPR对ATPR对肝癌细胞株BEL-7402、HEPG2生长抑制和分化作用有密切关系;RARα、RARβ、RARγ可能与ATPR结肠癌细胞株HT-29生长抑制和分化作用有密切关系;受体RARα、RXRα可能与ATPR对卵巢癌细胞株SKOV3生长抑制和分化作用有密切关系,但其确切的关系尚需进一步证实。

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实验一 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对消化系统

等肿瘤细胞的诱导分化的作用

1 前言

2 实验材料

2.1 细胞株

2.2 药物与试剂

2.4 主要溶液配制

2.5 仪器和设备

3 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 MTT法检测细胞增殖状况

3.3 细胞形态学观察

3.4 分化指标的检测

3.5 细胞周期和DNA倍体分析

3.6 统计学分析

4 结果

4.1 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）对肿瘤细胞增殖的影响

4.2 细胞形态学观察

4.3分化指标的检测

4.4 细胞周期及DNA倍体分析

5 讨论

6 小结

参考文献

实验二 4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对消化系统等肿瘤细胞中维甲酸受体及维甲类X受体的影响

1 前言

2 实验材料

2.1 细胞株

2.2 药物与试剂

2.3 主要溶液配制

2.4 仪器与设备

3 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤细胞中RARs和RXRs mRNA表达及ATPR对肿瘤细胞中RARs和RXRs的影响

3.3 统计学分析

4 结果

4.1 肿瘤细胞中维甲酸受体及维甲类X受体mRNA表达

4.2 ATPR对肿瘤细胞中维甲酸受体及维甲类X受体的影响

5 讨论

6 小结

参考文献

个 人 简 历

致谢

综述