烹调油烟中的细颗粒物对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞死亡受体信号通路相关蛋白表达的影响

摘要

目的：探讨油烟中的细颗粒物(PM2.5)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的细胞周期及死亡受体信号通路相关蛋白表达的影响。方法：用PM2.5采样器采集油烟中的细颗粒物,并用丙酮有机提取玻璃纤维膜中的颗粒物,最后用DMSO配制成浓度为200mg/ml染毒液。从孕18天的ICR母鼠体内取胎鼠,并从胎鼠的肺组织中提取肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行鉴定。分别用不同浓度油烟中细颗粒物对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行染毒0h、12h、24h和36h,检测细胞的存活率和用PI细胞周期检测试剂盒检测细颗粒物对细胞周期的影响;染毒36小时后采用western blot方法检测死亡受体信号通路相关蛋白表达的情况。结果：不同浓度的细颗粒物分别作用于AECⅡ0h、12h、24h、和36h后,产生了明显的细胞毒性,细胞存活率存在下降趋势,呈现出剂量-反应关系和时间-反应关系。用PM2.5对AECⅡ染毒以后,AECⅡ的细胞周期各个时相的细胞所占百分数与对照组相比发生改变,且随着染毒浓度的增高,细胞逐渐停滞于G0-G1期,与DMSO对照组比较差异有统计学意义(p<0.05),并显示出剂量-反应关系;进入S期的细胞逐渐减少,与DMSO对照组比较差异有统计学意义(p<0.05),并显示出剂量-反应关系;分布于G2-M期的AECⅡ细胞比例受PM2.5的影响,与DMSO对照组比较有统计学差异(p<0.05),但不存在剂量-反应关系。用PM2.5对AECⅡ染毒36h以后,可检测出Fas、Caspase8和Caspase3的蛋白表达,随着染毒浓度的升高,三种蛋白的表达量均呈现增加趋势,呈现出剂量-反应关系;Fasl未检测出。结论：细颗粒物(PM2.5)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)产生了细胞毒性,影响了细胞周期,可检测出Fas、Caspase8和Caspase3的蛋白表达,并呈现出剂量-反应关系。

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1 前 言

2 材料和方法

2.1 采样材料

2.3 试剂

2.5 样品的采集方法

2.6 细胞培养

2.7 胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的鉴定

2.8 PM2.5 对AECⅡ细胞存活率影响的MTT试验

2.9 细胞周期的测定

3.结果

3.1 肺泡Ⅱ型上皮细胞的鉴定

3.2 PM2.5对AECⅡ存活率的影响

3.3 PM2.5对AECⅡ细胞周期的影响

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综 述