促红细胞生成素对2日龄未成熟大鼠缺血性脑白质损伤后学习记忆能力的影响

摘要

目的:
　　建立未成熟大鼠脑白质损伤(white matter damage,WMD)动物模型,观察促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)对2日龄缺血性脑白质损伤大鼠脑细胞髓鞘碱性蛋白(MBP)表达及远期学习记忆能力的影响,探讨EPO对未成熟大鼠脑白质损伤后神经保护作用的可能机制。
　　方法:
　　将2日龄未成熟新生大鼠随机分为正常对照组即假手术组(Sham,n=36)、模型组(BCAO,n=36)、EPO治疗组(EPO,n=36)。采用双侧颈总动脉结扎术(Bilateral carotid artery occlusion,BCAO)建立缺血性脑白质损伤动物模型。对照组只分离双侧颈总动脉,但不结扎。EPO治疗组于BCAO后即刻给予腹腔注射EPO(5000u/Kg),对照组、BCAO组注射等体积生理盐水。三组大鼠于术后24h、48h、72h和7d、14d、35d分别测量体重、脑重,HE染色观察脑组织病理形态学改变,免疫组化染色检测脑组织MBP蛋白的表达。术后72h采用干湿法测定脑含水量;术后35天采用Morris水迷宫试验、跳台试验、闭暗试验进行神经行为学检测,观察EPO治疗对脑白质损伤未成熟新生大鼠体重、脑重、脑含水量、早期神经行为、脑组织病理形态学、学习记忆能力及MBP蛋白表达的影响。
　　结果:
　　(1)模型组大鼠体重、脑重增长不良,各时间点EPO治疗组大鼠体重、脑重增长明显高于模型组,与模型组比较差异有显著性(P<0.05);各时间点EPO治疗组大鼠体重、脑重与假手术组无显著性差异(P>0.05)。
　　(2)模型组脑组织含水量明显高于假手术组(P<0.05),EPO治疗后脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。
　　(3)HE染色模型组大鼠出现脑室周围白质损伤,光镜下表现为脑室周围白质细胞肿胀、囊性坏死、组织疏松;EPO治疗组脑白质细胞肿胀、囊性坏死等病理形态学改变较模型组减轻,具有凋亡特征的神经细胞明显减少。假手术组脑组织未见异常。
　　(4)术后24h、48h、72h三组大鼠MBP平均积分光密度比较差异无显著性意义(P>0.05);术后7d模型组大鼠MBP积分光密度与对照组、治疗组比较均明显降低,差异有显著性意义(P<0.05);EPO治疗后MBP积分光密度较模型组增高,与假手术组比较差异无显著性(P>0.05);术后14d、35d差异更为显著。
　　(5)35日龄时,模型组大鼠自主活动减少,反应迟钝,灵活性降低,Morris水迷宫试验、闭暗试验、跳台试验的结果均差于对照组和治疗组,差异有显著性(P<0.05)。EPO治疗后大鼠学习、记忆能力明显改善。
　　结论:
　　成功建立了2日龄未成熟新生大鼠脑白质损伤动物模型;在此基础上,应用EPO干预治疗脑白质损伤未成熟新生大鼠,可明显减轻脑白质损伤大鼠脑水肿,促进体重、脑重增长,降低早期神经行为异常发生率,减少细胞凋亡,进一步证实外源性EPO可提高大鼠学习、记忆能力,推测可能与促进未成熟新生大鼠脑白质 MBP蛋白表达,减少少突胶质细胞凋亡有关,为临床应用 EPO治疗早产儿脑损伤提供了实验依据。

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缩略词表

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1 前言

2 材料与方法

2.2 脑含水量测定

3 结果

3.1 生长发育

3.2 脑含水量(%)测定

3.3 脑组织病理形态学改变及光镜检查结果

3.4 细胞凋亡检测

3.5 早期神经行为观察与评价

3.6 远期学习记忆能力评估

3.7 免疫组织化学染色

4 讨论

4.1 早产儿WMD模型的建立

4.2 EPO在早产儿WMD中的作用

5 结论

参考文献

附录

致谢

早产儿脑损伤研究现状