OPG和RANKL基因单核苷酸多态性对类风湿关节炎易感性及其骨密度和疾病活动性的影响

摘要

背景：
　　类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种以累及外周关节为主的多系统性炎症性自身免疫性疾病,以对称性、多个周围关节的慢性炎症为特征,病变持续反复发作,最终可导致骨侵蚀、破坏、骨质疏松等。RANKL/RANK/OPG系统是近年来发现参与骨代谢的一个重要系统。有研究显示,在与这些蛋白相对应的基因中,某些基因单核苷酸多态性(Single-nuclear polymorphism,SNP)与某些种族RA患者的易感性、疾病活动性及骨密度相关。
　　目的：
　　探讨护骨素(OPG)基因(TNFRSF11B)1181G>C(rs2073618)位点、163A>G(rs3102735)位点和核因子κB活化因子受体配体(RANKL)基因(TNFRSF11)401A>G(rs2277438)位点SNP对RA患者疾病易感性及其骨密度(Bone mineral density,BMD)的变化和疾病活动性的影响。
　　方法：
　　采用连接酶检测反应(LDR)PCR方法检测200例RA患者和201例健康对照组OPG基因rs2073618、 rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP;采用DEXA法测定RA患者股骨和腰椎部位BMD,同时详细记录RA患者疾病活动性指标,包括关节压痛数、关节压痛指数、VAS评分、晨僵时间、关节肿胀数、关节肿胀指数、日常生活能力(HAQ)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)。比较其等位基因分布频率、基因型频率及单倍体型在RA组及对照组中的分布,并比较不同基因型RA患者间各部位BMD及各项疾病活动性指标的差别。
　　结果：
　　1.OPG基因rs2073618位点、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点各等位基因及基因型分布频率在RA组与对照组中均无明显差别(P>0.05)。
　　2.OPG和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438G-rs3102735G)携带者RA疾病易感性明显降低(1.5％vs6.0%)(OR:0.216,95%CI:0.081-0.575,P=0.0008),OPG和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438A-rs3102735G)携带者RA易感性明显增加(14.5%vs8.4%)(OR:1.862,95%CI:1.179-2.943,P=0.007)。
　　3.RANKL基因rs2277438位点表达为纯合型(AA和GG型)的RA患者(62例)L3(1.05±0.22vs0.93±0.26,t=2.314,P=0.023)、L4(1.06±0.24vs0.94±0.28,t=2.207,P=0.030)、L2-4(1.04±0.21vs0.89±0.28,t=2.788,P=0.007)部位BMD均明显高于杂合型(AG型)RA患者(39例);OPG基因rs2073618和rs3102735位点不同基因型RA患者间BMD无差别(P>0.05)。
　　4.以年龄、病程、HAQ、DAS28、糖皮质激素日使用剂量、糖皮质激素使用时间、OPG和RANKL基因型为自变量,以RA患者是否发生骨质疏松(0=无骨质疏松,1=骨质疏松)为应变量,采用二项分类的Logistic Regression(Backward LR法)分析,结果发现:RANKL基因rs2277438位点基因型(1=AA和GG型,2=AG型)为RA患者发生骨质疏松的危险因素(OR=2.932,P=0.048,95% CI:1.008-8.529)。
　　5.OPG基因rs2073618位点表达为纯合型(CC、GG型)的RA患者(60例)在下列疾病活动性指标上明显高于表达为杂合型(CG型)的RA患者(40例):关节压痛数(13.09±7.32 vs9.92±6.38,t=2.154,P=0.034)、关节压痛指数(18.68±11.34 vs13.49±9.40,t=2.318,P=0.023)、VAS评分(5.72±1.86 vs4.76±1.83,t=2.481,P=0.015)。RANKL基因rs2277438位点、OPG基因rs3102735位点不同基因型RA患者间各疾病活动性指标无差别(P>0.05)。
　　结论：
　　1.OPG基因rs2073618、rs3102735位点和RANKL基因rs2277438位点SNP与安徽籍汉族RA患者易感性无关。
　　2.OPG和RANKL基因单倍体型(rs2073618G-rs2277438G-rs3102735G)为RA的保护性因素,而单倍体型(rs2073618G-rs2277438A-rs3102735G)是危险因素。
　　3.RANKL基因rs2277438位点SNP与RA骨代谢相关,RANKL基因rs2277438位点AG基因型为是RA患者发生骨质疏松的独立危险因素。
　　4.OPG基因rs2073618位点SNP与RA患者疾病活动性相关。

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1.引言

2.材料与方法

2.1标本收集

2.2 BMD

2.3临床及实验室指标：

2.4 主要器材

2.5 试剂

2.6 实验操作步骤

2.7 实验结果：

2.8 统计分析

3.结果

3.1 等位基因频率与基因型分布

3.2 RA组不同位点基因型组间BMD的比较

3.3 RA患者骨质疏松发生率及其危险因素的多元回归分析

3.4 RA组不同位点基因型组间疾病活动性的比较

4.讨论

4.1 OPG、OPG基因及RANKL、RANKL基因

4.2 OPG、RANKL及其SNP与骨代谢

4.3 OPG、RANKL基因SNP与RA

5.结论

参考文献

附录1

附录2

附录3

附录4

附录5综述