他克莫司对糖尿病大鼠肾组织巨噬细胞浸润、增殖及活化的影响

摘要

研究背景:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)最主要也是最严重的微血管并发症之一,在发达国家DN己成为慢性肾功能衰竭的主要病因,在我国近年也有逐渐增高的趋势。DN的发病机制非常复杂,目前尚未完全阐明,近年来的研究表明主要以巨噬细胞所介导的炎症机制是其持续发展的关键因素。目前对DN的治疗包括低蛋白饮食、控制血糖、血压、血脂及应用肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)阻断剂等,但仅能延缓DN的发展,迄今尚无有效方法阻止DN向慢性肾功能衰竭进展,自从发现巨噬细胞的炎症效应是其持续发展的关键因素,寻找针对巨噬细胞的抗炎药物成为治疗的可能途径。他克莫司(Tacrolimus)是与环孢素A(Cyclosporine A,CsA)同类的一种新型强效免疫抑制剂,前期的研究表明他克莫司可通过抑制钙神经蛋白(Calcineurin,CaN)及骨桥蛋白(Ostepontin,OPN)等途径而对糖尿病肾脏产生保护作用,同时已有研究表明环孢素A可以通过抗炎作用预防早期DN的进展。
　　目的:研究他克莫司对糖尿病大鼠肾脏保护作用的机制与肾脏内巨噬细胞浸润、增殖及活化的关系,为DN的治疗提供理论依据和治疗线索。
　　方法:应用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立大鼠糖尿病模型。随机分为对照组(C)、模型组(Diabetes mellitus,DM)、他克莫司0.5及1.0mg.kg-1.d-1给药组(DM+Tacrolimus0.5、1.0),4周后观察大鼠血糖、体重、相对肾重(肾重/体重)(Relative weight of kidney,RKW)、尿白蛋白排泄率(Albumin excretion rate,AER)、肌酐清除率(Creatinine clearance rate,Ccr)及肾组织病理形态学变化。应用免疫组化单染及双染方法检测肾组织内巨噬细胞表面标志(ED-1巨噬细胞浸润指标)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA巨噬细胞增殖指标)及诱生性一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS巨噬细胞活化指标)的表达。
　　结果:与对照组相比,模型组大鼠表现为血糖升高、体重下降、相对肾重增加(P<0.01),他克莫司各给药组没有防止大鼠血糖升高、体重下降。他克莫司0.5mg·kg-1给药组相对肾重较糖尿病组有所下降,但未达统计学意义,他克莫司1.0mg·kg-1给药组相对肾重明显低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠AER明显高于对照组(P<0.01),各给药组大鼠AER明显低于模型组(P<0.05,0.01)。各给药组Ccr与模型组相比,差异无统计学意义。模型组肾小球平均容积(VG)与肾小管间质损伤指数(Indices for tubulointerstitial injury,TII)明显高于对照组(P<0.05,0.01),他克莫司0.5mg·kg-1给药组大鼠VG明显低于模型组(P<0.05),TII较模型组有所下降,但差异未达统计学意义,他克莫司1.0mg·kg-1给药组VG与TII均明显低于模型组(P<0.05,0.01)。免疫组化显示模型组大鼠肾组织ED-1+、PCNA+及iNOS+巨噬细胞数明显高于对照组(P<0.01),他克莫司0.5与1.0组ED-1+的巨噬细胞数与模型组比较无明显变化,PCNA+及iNOS+的巨噬细胞数明显低于模型组(P<0.01)。
　　结论:他克莫司可明显改善糖尿病大鼠早期肾损害,其机制可能部分与抑制肾组织中巨噬细胞的增殖及活化有关。

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英文缩略词表（abbreviations）

中 文 摘 要

英文摘要

1 前言

2 材料与方法

2.1材料

2.1实验所需的主要仪器设备

2.2研究方法

3 结果

3.2 各组大鼠肾组织病理形态学改变

3.3 各组大鼠肾组织ED-1＋细胞数变化

3.4 各组大鼠肾组织ED-1＋PCNA+细胞数变化

3.5各组大鼠肾组织ED-1+iNOS＋细胞数变化

4 讨论

4.1.DN发病的炎症机制

4.2.DN的抗炎治疗

4.2.1霉酚酸酯（MMF）

5 结论

6 研究工作的进一步设想

参考文献

附录

致谢

综 述