慢性应激和糖皮质激素对卵泡发育和分泌E2功能的非Gn依赖的作用研究

摘要

目的:
　　旨在观察慢性心身应激及应激激素即糖皮质激素对卵泡生长发育、卵巢颗粒细胞增殖和分泌雌二醇功能的非促性腺激素(Gn)依赖作用,为将来进一步深入研究慢性应激导致的卵巢内分泌功能异常的机制提供基础。
　　方法:
　　(1)补充足量外源性Gn,观察慢性应激和低剂量、高剂量DEX的非Gn依赖效应。(2)小鼠卵巢石蜡切片HE染色,观察慢性应激和低剂量、高剂量DEX(人工合成糖皮质激素)对小鼠卵泡生长发育的形态学影响。(3)BrdU掺入法结合小鼠卵巢切片免疫组化方法,观察慢性应激和低剂量、高剂量DEX对小鼠卵泡颗粒细胞增殖的作用。(4)ELISA方法检测慢性应激和低剂量、高剂量DEX对小鼠血清雌二醇(E2)水平的影响。
　　实验结果:
　　(1)慢性应激和注射低剂量、高剂量DEX,辅以补充足量外源性Gn后,小鼠卵巢正常次级卵泡和正常窦卵泡数目明显减少,闭锁次级卵泡和闭锁窦卵泡数目明显增多。
　　(2)慢性应激和注射低剂量、高剂量DEX,辅以补充足量外源性Gn后,小鼠卵泡BrdU掺入的新增殖的颗粒细胞明显减少。
　　(3)慢性应激和注射低剂量、高剂量DEX,辅以补充足量外源性Gn后,小鼠血清E2水平明显降低。
　　结论:
　　外源性补充促性腺激素后,慢性应激和应激激素糖皮质激素仍明显抑制小鼠卵泡发育,抑制颗粒细胞增殖,导致血清E2水平降低。提示慢性应激可通过非Gn依赖途径发挥抑制卵泡发育和卵巢内分泌功能。已知慢性应激伴随着糖皮质激素水平升高,所以结果还提示糖皮质激素是慢性应激抑制卵泡发育和功能的重要参与因素。研究结果同时还提示,抑制颗粒细胞增殖可能是慢性应激和应激激素糖皮质激素抑制卵泡发育和分泌雌激素功能的途径和靶点。

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前言

1.1 试验动物

1.2 试验试剂

1.3 主要溶液的配制

1.4 主要仪器设备

2试验方法

2.1小鼠慢性不可预见性温和应激模型建立

2.2 分组及给药

2.3 小鼠卵巢石蜡切片制作

2.4采用BrdU掺入法结合免疫组化法观察卵泡颗粒细胞增殖情况

2.5 ELISA方法检测小鼠血清雌二醇

2.6 质量控制

2.7统计分析

3试验结果

3.1 慢性应激对小鼠卵泡形态学的影响

3.2 BrdU掺入法结合免疫组化方法观察卵巢颗粒细胞的增殖

3.3 ELISA方法检测慢性应激、高剂量DEX、低剂量DEX对小鼠血清雌二醇的变化

4.讨论

4.1 慢性不可预见性温和应激小鼠模型的鉴定

4.2颗粒细胞增殖和分泌功能的影响

4.3慢性应激对小鼠卵巢卵泡生长发育的影响

4.4长期高剂量、长期低剂量DEX对小鼠卵巢卵泡生长发育的影响

4.5透视电镜下观察卵母细胞、颗粒细胞超微结构的变化

4.6慢性应激、长期高剂量DEX与长期低剂量DEX注射后小鼠血清中雌激素的变化

4.7 展望

5结论

参考文献

附录

致谢

综述