应用SELDI-TOF-MS技术在贲门癌诊断中的初步研究

摘要

目的:贲门癌(Gastric cardia adenocarcinoma,GCA)是我国太行山一带农村高发的消化道恶性肿瘤,其发病率在胃癌、食道癌等癌种受到人们重视并得到一定控制时却又有升高的趋势。由于其特殊的发病部位和生物学行为使得患者难以被早期发现,早期诊断,往往在发现时便失去有效的治疗机会,治疗后五年生存率低。因此,早期诊断对其治疗和预后有重要意义。近些年,蛋白组学成为对疾病特别是肿瘤研究的重点。有关蛋白组学的研究方法中,表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass,SELDI-TOF-MS)在肿瘤标志物检测等方面显示出了操作简单,取材方便,高效高通量等明显优势。本研究尝试利用SELDI-TOF-MS技术,检测并对比贲门癌患者及正常人的血清蛋白指纹图谱,建立贲门癌诊断决策树,并筛检能够提示贲门癌淋巴转移的相关蛋白,为临床早期诊断贲门癌及判断预后提供新的手段和方法。
　　方法:临床采集101例贲门癌及118例健康人血清分别作为试验组和对照组,采用SELDI-TOF-MS结合CM10弱阳离子蛋白交换芯片检测各组血清,用biomarker wizard(BMW)软件对结果进行分析,得到试验组和对照组间的有效差异蛋白峰,通过Biomarker Patterns Software(BPS)从中筛取四个蛋白峰建立贲门癌诊断决策树,并对随机选取的样本用盲法验证决策树的敏感性和特异性。进一步分析对比有淋巴转移和无淋巴转移的贲门癌患者血清的蛋白指纹图谱得到差异蛋白,分析其受试者工作特征曲线(receiver operative characteristic curves,ROC曲线)并验证其诊断效能。
　　结果:BMW软件分析对比出贲门癌患者试验组和健康人对照组血清,共有56个蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),其中质荷比M/Z为5480.49的蛋白峰差异最具显著性。BPS软件以质荷比M/Z5480.49的差异蛋白为主要根节点,联合另外几个质荷比M/Z分别为7773.55,2858.63,2924.03等几个差异蛋白建立诊断分类树模型,其敏感性为95.05％(96/101),特异性为95.76%(113/118)。检测淋巴结转移和未转移患者的血清,其中11个差异蛋白有统计学意义(P<0.05),ROC曲线表明,质荷比M/Z3820.87的蛋白峰可提示贲门癌患者有无淋巴转移,其敏感性为84.4%(38/45),特异性为82.1%(46/56)。
　　结论:SELDI-TOF-MS技术可建立有较高灵敏性和特异性的GCA诊断模型,筛选出能够提示发生淋巴转移的差异蛋白,有助于贲门癌的早期筛查、诊断和预后判断。

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实验设计与流程

1 前言

2 试验材料与方法

2.1 试验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 贲门癌和正常对照组血清蛋白差异分析

3.2 贲门癌血清学诊断模型的建立

3.3 贲门癌诊断模型的准确性验证

3.4 贲门癌有淋巴结转移和无淋巴转移患者的血清差异蛋白的筛选

3.5 分别绘制贲门癌有淋巴转移和无淋巴转移患者血清差异蛋白的ROC曲线并计算其曲线下面积（area under the curve ，AUC），并用AUC值作为评价其诊断效能的指标，蛋白曲线 AUC 值越接近于 1 诊断效能越高，可见其中的质荷比 M/Z 3820.87的差异蛋白诊断效能最高，其曲线下面积达到82.5％。用其鉴别有、无淋巴转移的贲门癌患者，其敏感性为84.4%（38/45），特异性为82.1%（46/56）。ROC曲线如图5。

4 讨论

5. 结论

6 参考文献

附 录

致谢

文献综述