全长脂联素对高糖环境下结肠癌细胞增殖和凋亡影响的研究

摘要

目的:观察在高糖环境下不同浓度的全长脂联素(f-APN)对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响;探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路以及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活化在f-APN诱导结肠癌细胞凋亡过程中的作用。
　　方法:应用不同浓度(0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml)的全长脂联素(f-APN)干预在高糖培养基(葡萄糖含量为4.5 g/L的DEME培养基)中培养的结肠癌细胞株SW48024h、48h,分为高糖不加f-APN(APN0组)、高糖+10μg/ml f-APN组(APN10组)、高糖+20μg/mlf-APN组(APN20组)、高糖+30μg/ml f-APN组(APN30组)以及高糖+30μg/ml f-APN+p38MAPK阻滞剂SB203580(10μmol/L)组(APN30+SB组),同时采用低糖培养基(葡萄糖含量为1.0 g/L的DEME培养基)培养SW480细胞作为对照组(NC组)。分别应用MTT法以及流式细胞仪检测细胞的增殖、凋亡率;应用Western blot检测活性p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达情况。
　　结果:(1)f-APN干预SW480细胞24h后, APN30组细胞吸光度值(OD值)较APN0组、APN10组、APN20组均显著降低(P<0.05);干预48h后,APN10组、APN20组以及APN30组OD值均较APN0组显著降低(P<0.01~0.05),且 APN10组、APN20组、APN30组三组间OD值逐渐降低(P<0.05)。
　　(2)f-APN干预SW480细胞24h后,APN0、APN10组、APN20组、APN30组细胞凋亡率分别为:3.89％、4.94%、7.43%、8.67%;干预48h后,上述四组细胞凋亡率分别为3.96%、6.21%、8.86%、9.47%。其中,24小时后APN30组细胞凋亡率显著高于APN0、APN10组、APN20组(P<0.05);48h后APN10组、APN20组、APN30组细胞凋亡率显著高于APN0组(P<0.05~0.01),且APN10组、APN20组、APN30组三组间细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05)。
　　(3)Western-blot结果显示:与APN0组比较,APN20组、APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达均显著增高(P<0.01);与APN20组相比, APN30组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著增高(P<0.05);与APN30组相比, APN30+SB组p-p38MAPK以及Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。
　　结论:(1)高糖环境下,f-APN可抑制结肠癌细胞株SW480细胞的增殖,诱导其凋亡,这种效应呈浓度和时间依赖关系;
　　(2)高糖环境下,f-APN促凋亡效应可能与脂联素通过激活p38MAPK通路,活化Caspase-3有关。

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缩略中英文对照索引(ABBREVIATION INDEX)

中文摘要

英文摘要

1.前言

2.材料与试剂配制

2.1实验细胞与试剂

3. 实验方法

3.1 细胞的培养

3.2 实验分组

3.3 MTT法检测不同干预条件下SW480细胞增殖活性的变化

3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率

3.5 Western blot测定p-p38MAPK、Caspase-3的表达

4. 统计学方法

5. 结果

5.1 高糖环境下，不同浓度、不同时间f-APN干预对SW480细胞增殖活性的影响

5.2 高糖环境下，f-APN在不同浓度、不同时间干预下SW480细胞凋亡率的变化

5.3 高糖环境下，不同浓度f-APN干预SW480细胞48h后p-p38MAPK以及活性Caspase-3蛋白表达

6 讨论

6.1 f-APN对高糖环境下SW480细胞的增殖和凋亡的影响

6.2 f-APN可能通过激活p38MAPK通路，活化Caspase-3诱导结肠癌细胞的凋亡

6.3 结束语

结论

参考文献

附录一

附录二

综述