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缩略词表
第一章文献综述 第一部分紫杉醇生物合成的分子生物学
第一节紫杉醇生物合成上游途径的分子生物学和生物化学
1.萜类在细胞质中通过MVA途径生物合成
2.萜类在质体中通过DXP途径生物合成
3.MVA途径上的基因和酶
4.DXP途径上的基因和酶
5.MVA途径和DXP途径之间的交流
第二节紫杉醇生物合成下游途径的分子生物学和生物化学
1.紫杉醇20碳前体骨架GGPP的生物合成
2.紫杉二烯合成酶催化GGPP环化生成紫杉二烯
3.紫杉二烯官能化过程中涉及到的酶和基因
第三节紫杉醇生物合成分子生物学小结
第一章文献综述 第二部分抗癌萜类吲哚生物碱的代谢工程
1. TIAs生物合成上游途径中的关键酶TDC、G10H和STR及其应用
2.长春花TIAs生物合成代谢全局转录调控因子ORCA3及其应用
第二章材料与方法 第一部分紫杉醇前体生物合成途径的分子生物学
1.植物材料
2.菌株和表达载体
3.仪器和设备
4.试剂盒及购买的试剂
5.自配的主要标准试剂
6.自配的其它试剂
7.方法与步骤
7.1曼地亚红豆杉材料的准备
7.2曼地亚红豆杉细胞的诱导处理
7.3诱导处理曼地亚红豆杉细胞RNA的抽提
7.4从成熟的曼地亚红豆杉组织中提取高质量RNA
7.5曼地亚红豆杉DNA的提取
7.6曼地亚红豆杉基因组步移DNA库的构建
7.7从曼地亚红豆杉总RNA合成第一链cDNA
7.8目的基因克隆
7.9 Southern blot分析
7.10基因表达分析
7.11亚克隆、测序
7.12生物信息学分析
7.13基因的功能验证
第二章材料与方法 第二部分抗癌萜类吲哚生物碱的代谢工程
1.喜树TIAs的代谢工程
1.1植物材料
1.2长春花tdc、g10h、str和orca3基因编码区的克隆
1.3植物表达载体pCAMBIA1304++str+tdc的构建
1.4农杆菌C58C1和LBA4404的转化
1.5根癌农杆菌LBA4404介导p1304++str+tdc遗传转化喜树
1.6转基因喜树PCR和RT-PCR检测
1.7喜树碱和羟基喜树碱含量测定
2.长春花抗癌萜类吲哚生物碱代谢工程的基础工作
2.1植物表达载体pCAMBIA1304++g10h、pCAMBIA1304++orca3、pCAMBIA1304++g10h+orca3的构建
2.2质粒转化农杆菌C58C1和LBA4404
2.3根癌农杆菌C58C1(disarmed and harboring pRiA4)介导pCAMBIA1304++g10h、pCAMBIA1304++orca3、pCAMBIA1304+g10h+orca3遗传转化长春花
2.4长春花转基因毛状根PCR和RT-PCR检测
第三章结果和讨论 第一部分紫杉醇前体生物合成的分子生物学
1.建立从成熟的红豆杉组织中提取高质量RNA的方法
2.紫杉醇生物合成上游途径中重要基因的克隆、分析和功能验证
2.1紫杉醇生物合成MVA途径上重要基因的克隆、分析与功能鉴定
2.2紫杉醇生物合成DXP途径上限速酶基因dxs和dxr的克隆与分析
2.3合成紫杉醇20碳二萜骨架的香叶基香叶基二磷酸合成酶(tmGGPPS)
第三章结果和讨论 第二部分抗癌萜类吲哚生物碱的代谢工程
1.喜树TIAs的代谢工程
1.1中间载体p1304+的构建
1.2带相应粘性末端酶切位点的目的基因编码区的扩增
1.3目的基因植物高效表达载体p1304++str+tdc的构建
1.4农杆菌介导p1304++str+tdc遗传转化喜树
1.5喜树转长春花tdc和str基因的PCR和RT-PCR检测
1.6喜树愈伤组织羟基喜树和喜树碱含量测定
2.长春花TIAs代谢工程基础工作
2.1目的基因植物表达载体p13++g10h，p1304++orca3，p1304++g10h+orca3的构建
2.2 C58C1介导p1304++g10h，p1304++orca3，p1304++g10h+orca3对长春花的遗传转化
2.3长春花毛状根的继代培养
2.4长春花转基因毛状根的PCR和RT-PCR检测
2.5 小结
参考文献
攻读博士学位期间发表的SCI论文
致谢
论文独创性声明和论文使用授权
复旦大学;
