胚胎神经干细胞对老化小胶质细胞存活及JNK信号通路蛋白的调控机制

摘要

目的
　　神经干细胞(Neuralstemcell,NSC)具有增殖和分化为中枢神经系统(Cetntralnervoussystem,CNS)细胞的能力,能够促进神经元细胞的再生,同时具有表达神经营养因子、代谢酶、神经递质及促进脑和神经元恢复的功能,为神经退行性疾(Neurodegenerativedisease,ND)的治疗提供了新的有效途径。目前对神经干细胞治疗神经退行性病的机制还不清楚,其可能通过多个通路参与到脑老化和神经退行性疾病的防治过程。目前受到较多关注的是MAPKS信号通路。
　　本课题假设胚胎神经干细胞能通过活化老化的小胶质细胞MAPKS信号通路中的c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)信号通路途径对因老化而致的神经系统退行性疾病起保护作用.采用分离原代细胞和共培养等方法来研究神经干细胞对老化小胶质细胞的存活及调控机制,探讨脑老化及神经退行性疾病的可能病理机制,为寻找神经退行性疾病的新的治疗途径提供帮助。
　　方法
　　原代培养的小胶质细胞和神经干细胞分别取自12～18个月龄的ICR小鼠及孕12.5d的ICR小鼠,小胶质细胞特异性标记物IB4染色、神经干细胞免疫荧光检测Nestin,对两种细胞进行鉴定。利用插入式共培养系统将小胶质细胞与神经干细胞(1:4)共培养,MTT法检测共培养对细胞增殖能力的影响;用20ng/mLJNK抑制剂(SP600125)预处理小胶质细胞4h,再加入神经干细胞共培养3d,免疫印迹检测共培养前后小胶质细胞P-JNK的相对表达量(P-JNK与JNK表达量比值)。
　　结果：
　　1.成功分离出胚胎神经干细胞,Nestin染色呈阳性。
　　2.分离出老化小胶质细胞并进行原代培养,利用小胶质细胞特异性标记物IB4进行染色,结果显示细胞纯度在80％以上。
　　3.共培养组小胶质细胞在培养3d,5d,7d后增殖能力均显著高于单纯小胶质细胞组和神经干细胞组。
　　4.与神经干细胞共培养的小胶质细胞JNK信号通路显著激活,且可被JNK抑制剂SP600125抑制。
　　结论
　　1.与神经干细胞共培养可显著增强小胶质细胞的增殖能力
　　2.神经干细胞可能通过分泌某种因子激活小胶质细胞JNK信号通路促进老化小胶质细胞的存活。

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主要仪器设备和常用试剂的配制

第一部分 胚胎神经干细胞与老化小胶质细胞的分离、培养与鉴定

1.引言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

第二部分 神经干细胞对老化小胶质细胞存活及JNK信号通路蛋白的调控机制

1.引言

2.材料与方法

3．结果

5.全文结论

研究展望

参考文献

个人简介

致谢

综述