高钾溶液对慢性非细菌性前列腺炎SD大鼠前列腺平滑肌细胞内钙离子浓度的影响及意义

摘要

目的：建立慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,探讨SD大鼠慢性非细菌性前列腺炎前列腺平滑肌细胞(PSMC)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)在高钾溶液作用下的变化及临床意义。
　　方法：将SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只。实验组行去势手术,十周切口愈合后腹腔注射17-β雌二醇0.25mg/kg次/d,对照组每只大鼠腹腔注射生理盐0.6ml每日一次。连续注射30d后,CO2吸入处死,于无菌条件下迅速取出前列腺背外侧叶组织置入D-Hanks液,转入无菌室超净台,除去前列腺的血管、被膜及脂肪等组织,每只大鼠取部分组织行HE染色,石蜡包埋切片后行组织学观察。体外培养纯化PSMC,在细胞传代至共聚焦专用培养皿中第3天,弃去培养液,避光条件下加入4μl Quest Fluo-8TM和500μl NPSS,使其终浓度为0.5μmol/l,并置于培养箱中静置孵育1h,然后用无Ca2+Crebs洗涤,向共聚焦专用培养皿中加入1ml Crebs,转移至激光共聚焦显微镜上,激发波长为488nm,选择512×512像素采集二维图片,每10S扫描一帧,观测细胞内钙离子荧光强度。检测基线后,缓慢向共聚焦专用培养皿中加入高钾溶液250μl,使其终浓度为60mmol/L。每视野选取5个细胞,观测钙离子荧光强度的变化情况,所得图片应用激光共聚焦显微镜专用软件转化为实验数据,取平均值。采用SPSS18.0软件进行分析,实验数据以x±s表示,采用单因素成组资料的t检验。
　　结果：光镜下显示实验组标本具有典型慢性前列腺炎(CP)的病理特征,对照组未见炎症表现。采用免疫细胞化学方法证实实验组和对照组为前列腺平滑肌细胞。实验组和对照组PSMC内钙离子荧光强度升高幅度分别为27.86±9.88和7.61±4.31,组间差异有统计学意义(P<0.01)。
　　结论：采用去势+雌二醇注射的方法可成功建立CP模型。CAPSD大鼠PSMC内[Ca2+]i在高钾溶液作用下的升高幅度明显大于正常对照组,高钾溶液引起细胞外钙离子的跨膜内流,导致细胞内钙离子浓度升高,可能会影响到细胞及前列腺的各项生理功能,在慢性前列腺炎发病机制中可能具有一定作用。

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英文摘要

1 引言

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1主要试剂

2.1.2主要仪器

2.1.3相关试剂的配制

2.2 实验方法

2.2.1 CP模型的建立

2.2.2 PSMC的体外培养及纯化、鉴定

2.2.3 PSMC内钙离子荧光强度实时检测与图像分析

2.2.4 统计学方法

3 结果

3.1 造模及细胞培养结果

3.2 高钾溶液作用下PSMC内[Ca2+]i荧光强度的变化结果

4 讨论

5 结论

6 不足和展望

参考文献

附录

致谢

综述

论文一

论文二