5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对胃癌SGC-7901及其CHFR基因表达的影响

摘要

目的：胃癌是全球最常见的癌症致死原因之一,胃癌每年新发病例数约占全球新发病人数的一半。众所周知,表观遗传学改变是胃癌最重要的发病机制,DNA甲基化和组蛋白修饰是表观遗传学改变主要的两种形式。抑癌基因的表观遗传学改变是胃癌发生最重要的因素。CHFR是有丝分裂细胞检查点基因与胃癌的发生、发展都有密切关系。我们实验室前期已经展示了抑癌基因启动子区与肿瘤的发展关系密切。本研究主要探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞株的增殖及对CHFR基因表达水平的影响。
　　方法：体外培养胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803,将实验分为对照组:未加任何药物组;5-Aza-dC组:浓度为10μmol/L;TSA组:浓度为1μmol/L;5-Aza-dC+TSA组:向培养瓶内加入10μmol/L的5-Aza-dC,培养24小时后再加入含1μmol/LTSA的培养液继续培养。观察5-Aza-dC或TSA单独或联合作用于SGC-7901和MGC-803细胞株24,48和72小时,应用CCK-8法观察其细胞的抑制率,细胞抑制率=[1-(实验组吸光值-空白组吸光值)/(对照组吸光值-空白组吸光值)]×100％;通过流式法观察5-Aza-dC或TSA单独或联合作用SGC-7901和MGC-803细胞株48小时的细胞凋亡率。同样方法,用RT-PCR、Western Blotting观察CHFR基因的mRNA和蛋白表达的水平。
　　结果：对于SGC-7901细胞株,5-Aza-dC单独处理24、48与72小时的抑制率分别为19.3%、31.8%和52.5%;TSA组分别为16.3%,33.2%和62.0%;二药联合组分别为33.1%,49.7%和70.0%;而在MGC-803细胞株,5-Aza-dC单独处理组的抑制率分别为22.0%,37.8%和56.2%;TSA组分别为23.4%,40.8%和66.3%;二药联合组分别为37.9%,55.6%和77.2%。对于SGC-7901细胞株,5-Aza-dC单独处理48小时的凋亡率分别为11.47%;TSA为13.57%;联合组为18.12%,而对于细胞株MGC-803,5-Aza-dC组为17.43%;TSA组为21.43%;联合组为28.65%。对于SGC-7901细胞株,CHFR的mRNA相对表达量,对照组为0.061±0.0001,5-Aza-dC为0.167±0.034,TSA组为0.132±0.009,联合组为0.265±0.005。对于SGC-7901细胞株,CHFR蛋白的相对表达量,对照组为0.074±0.006,5-Aza-dC为0.431±0.020,TSA组为0.290±0.061,联合组为0.590±0.048。
　　结论：5-Aza-dC和TSA单独处理均能抑制SGC-7901和MGC-803细胞的增殖,其中MGC-803细胞比SGC-7901对这二种药物处理更敏感,且成时间依赖性,二药抑制肿瘤细胞增殖作用之间存在协同作用。进一步通过作用机制的分析,我们发现5-Aza-dC或者TSA处理均能有效提高其mRNA和蛋白表达的水平,二药联合使用效果增强。我们研究的结果提示5-Aza-dC和TSA具有潜在的临床应用前景。

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1. 引言

2材料与方法

2.1 主要材料

2.2 试验方法

2.3 RT-PCR方法检测CHFR基因在各用药组细胞系中RNA的表达

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 5-氮杂-2-脱氧胞苷单独或联合曲古抑菌素A对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的增殖作用

3.2 5-氮杂-2-脱氧胞苷单独或联合曲古抑菌素 A 对胃癌 SGC-7901、MGC-803细胞的凋亡作用

3.3 RT-PCR法检测5-氮杂-2-脱氧胞苷单独或联合曲古抑菌素A对胃癌SGC-7901细胞株CHFR基因mRNA 表达情况

3.4 Western Blotting法检测CHFR基因的蛋白表达水平的结果

4. 讨论

5结论

参考文献

附录

致谢

综述