联合骨形成蛋白-2与成骨细胞诱导骨髓基质细胞成骨分化的实验研究

摘要

目的:
　　探讨并评估骨髓基质细胞(BMSCs)在骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和成骨细胞(osteoblasts)分别单独诱导及联合诱导作用下,其骨向分化能力的差别,为组织工程中骨髓基质细胞的成骨分化诱导提供新的思路。
　　方法:
　　1、运用全骨髓贴壁法分离培养4w龄SD大鼠的骨髓基质细胞(BMSCs),通过分离、培养、纯化BMSCs,得到纯化的P3代细胞待用。
　　2、BMSCs的鉴定:通过逐日的形态学观察并记录,采用倒置相差显微镜及透射电子显微镜观察,鉴定是否是骨髓基质细胞;
　　3、通过改进酶消化法结合反复贴壁法培养1d龄SD乳鼠的成骨细胞。
　　4、形态学观察结合ALP染色检测手段对成骨细胞进行鉴定。
　　5、实验分四组:rhBMP-2诱导组、成骨细胞诱导组、rhBMP-2+成骨细胞诱导组、单纯培养液组。将分别于第3、6、9d所取的细胞培养液上清液收集在一起,测定各组第3、6、9d的ALP的含量并进行统计学分析。
　　结果:
　　1、运用贴壁生长法的成功培养出BMSCs,形态学观察具有BMSCs的典型形态学特征。
　　2、通过改进酶消化法结合反复贴壁法成功培养出成骨细胞,形态学观察具有成骨细胞的典型形态学特征,碱性磷酸酶检测显示为阳性。
　　3、rhBMP-2诱导组、成骨细胞诱导组、rhBMP-2+成骨细胞诱导组均检测出成骨细胞生成,单纯培养液组未观察到成骨细胞的生成。其中,rhBMP-2+成骨细胞诱导组培养上清液ALP含量明显较另两组大,并具有统计学意义。
　　结论:
　　1、rhBMP-2、成骨细胞、rhBMP-2联合成骨细胞均能提供成骨微环境,并在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化。
　　2、rhBMP-2联合成骨细胞对骨髓基质细胞的成骨向分化具有更优的诱导能力。

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前言

1． 骨组织工程的种子细胞的研究概况

2. BMSCs向成骨细胞定向分化的研究现状

2.1 化学物质的作用

2.2 细胞因子的影响

2．3细胞对骨髓基质细胞的骨向诱导分化

2．5中药提取物作用下的分化

2．6转基因作用下的分化

3. 本课题研究思路的提出

4. 具体研究内容：

实验主要仪器及试剂

实验一 骨髓基质细胞（BMSCs）分离培养及鉴定

1. 研究目的

2. 实验材料

4．实验结果

5. 讨论

6. 结论

实验二 成骨细胞分离培养及鉴定

1. 研究目的

2. 实验材料

3. 实验方法

4. 实验结果

5. 讨论

6. 结论

实验三 rhBMP-2、成骨细胞诱导骨髓基质细胞成骨分化及检测

1. 研究目的

2. 实验材料

3.实验方法

4. 结果

5. 讨论

6. 结论

参考文献

附 录

致谢

综述