体外培养小鼠微量圆形精子细胞冷冻保存研究

摘要

第一部分体外培养小鼠微量圆形精子细胞冷冻保存方法研究
　　目的:探讨体外培养微量小鼠圆形精子细胞的最佳冷冻方法和冷冻条件。方法:采用玻璃化冷冻和常规慢冷冻分别在不同浓度甘油(5％、7%、11%)及不同平衡时间(0、15、30、45、60min)条件下对体外培养所获微量小鼠圆形精子细胞进行冷冻保存。结果:(1)玻璃化冷冻和常规慢冷冻在7%甘油中平衡时间30min均可获得最佳复苏率;(2)在最佳冷冻条件下,玻璃化冷冻小鼠圆形精子细胞的复苏率显著高于常规慢冷冻方法(P<0.05)。结论:采用玻璃化冷冻方法,在7%浓度的甘油保护剂中平衡30min行微量小鼠圆形精子细胞冷冻,可获得较满意的细胞复苏率。
　　第二部分冻融体外培养小鼠圆形精子细胞在体外受精中的应用价值
　　目的:探讨冻融体外培养小鼠圆形精子细胞在体外受精中的应用价值。方法:对玻璃化冷冻复苏的体外培养小鼠圆形精子细胞标记DAPI荧光染料,行小鼠卵泡浆内显微注射(ROSI)后观察其受精和胚胎发育过程。结果:解冻后精子细胞DAPI标记率为100%,ROSI后双原核期雄原核的DAPI标记率为80.0%,第一次卵裂的2细胞期标记率为77.3%;受精率、2-细胞率、4-8细胞率、桑囊胚率分别为51.9%、51.0%、41.8%和12.2%。结论:冻融小鼠圆形精子细胞具有一定的受精能力和胚胎发育潜能。

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引 言

第一部分 体外培养小鼠微量圆形精子细胞冷冻保存方法研究

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析

4 结果

5 讨论

6结论

第二部分 冻融体外培养小鼠圆形精子细胞在体外受精中的应用价值

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

附 录

致谢

综述