牛乳铁蛋白抗菌肽抗人肺癌细胞增殖及其作用机制研究

摘要

目的：探索牛乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)抗人肺癌细胞功能及其作用机制。
　　方法：体外培养人肺腺癌A549细胞株,实验分为:阴性对照组、LfcinB处理组和阳性对照组。采用MTT法检测牛乳铁蛋白抗菌肽对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率。RT-PCR法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3mRNA水平的表达量;Westernblot方法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达量。
　　结果：1、与阴性对照组相比,不同浓度的LfcinB作用48h后均对肺癌A549细胞增殖有抑制作用,其中以10-2g/L浓度的乳铁蛋白抗菌肽的抑制率最高。2、与阴性对照组相比,不同浓度的LfcinB作用于肺癌A549细胞24、48和72h后,G0/G1期细胞略有减少,S期细胞逐渐增多,G2/M期细胞略有减少,且在72h结果最为显著(P<0.01)。LfcinB在10-6～10-2mg/ml浓度范围内作用48、72h均可诱导肺癌A549细胞凋亡,随着药物浓度增高,诱导凋亡作用加重,有明显的剂量效应关系。3、RT-PCR和Westernblot结果表明:与阴性对照组相比,Bax的表达随着LfcinB浓度升高而升高;Bcl-2的表达随着LfcinB浓度升高而降低;Caspase-3的表达随着LfcinB浓度升高而升高。
　　结论：LfcinB能显著抑制人肺腺癌A549细胞增殖,使细胞阻滞于S期,并诱导细胞凋亡。LfcinB通过促进细胞中Bax的表达及抑制Bcl-2的表达来调控A549细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关。

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1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2主要试剂

2.3 实验方法

2.3.1细胞培养和分组

2.3.2 MTT法检测 LfcinB 对人肺腺癌A549细胞毒性作用

2.3.3 流式细胞仪检测细胞周期

2.3.4 流式细胞仪检测细胞凋亡

2.3.5 细胞总RNA提取

2.3.6 RNA定量及纯度鉴定

2.3.7逆转录反应

2.3.8引物设计与合成

2.3.9细胞总蛋白提取

2.3.10蛋白定量

2.3.11 Western blot 分析

2.3.12 统计学处理

3 结果

3.1 LfcinB 对A549细胞增殖的影响

3.2 LfcinB对A549细胞周期的影响

3.3 LfcinB对A549细胞凋亡的影响

3.4 RT-PCR技术检测Bax、bcl-2 caspase-3 mRNA表达量

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述