CDX2基因过表达对胃癌细胞系BGC-823基因表达谱的影响

摘要

目的:观察转染CDX2基因前后人胃癌细胞系BGC-823基因表达谱的变化。
　　方法:经脂质体介导真核表达载体pEGFP-C1-CDX2和空载体pEGFP-C1转染人胃癌细胞系BGC-823,G418抗性克隆筛选后获取稳定转染细胞,利用RT-PCR和Western blot检测CDX2基因的表达。应用人类表达谱芯片Affymetrix2.0筛选两组细胞的差异表达基因(以表达差异≥2.0或≤0.5倍为限),选择部分差异表达基因进行Real-time PCR验证。利用RT-PCR检测人胃癌细胞MGC-803、BGC-823、SGC-7901和正常胃粘膜细胞GES-1以及10例胃癌组织和相应癌旁组织中这些差异表达基因的表达情况。
　　结果: RT-PCR和Western blot结果显示,转染组有CDX2基因mRNA和蛋白表达,空白细胞组和空载体组中无明显CDX2基因表达。基因芯片筛选出CDX2转染人胃癌细胞BGC-823差异表达基因599个,其中上调基因275个,下调基因324个,这些基因主要涉及细胞的增殖、分化、凋亡、信号转导、蛋白酶活性、细胞粘附等方面;Real-time PCR检测6个差异表达基因DKK3、FOXP1、TWIST1、GATA6、RUNX3和BMP2,其结果与芯片结果一致,确定芯片结果可靠。RT-PCR检测这6个差异表达基因在胃癌组织和癌旁组织中的表达存在差异性(P<0.05),在人胃癌细胞株和正常胃粘膜细胞株中的表达也存在差异性(P<0.05)。
　　结论: CDX2转染人胃癌细胞BGC-823后差异表达基因经人类表达谱芯片筛选成功,为进一步探索胃癌中CDX2的作用机理提供线索。

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前言

1 材料与方法

1.1 质粒和细胞株

1.2 组织标本

1.3 仪器设备

1.4 主要耗材

1.5 主要试剂

1.6 实验方法与步骤

1.7 0.35 1.4 5μl 50μl

2 结果

2.1 重组质粒pEGFP-C1-CDX2转染效率的检测

2.2 RT-PCR检测转染细胞株的CDX2基因mRNA表达

2.3 Western blot检测转染细胞株的CDX2基因蛋白的表达

2.4 基因芯片结果

2.5 Real-time PCR 验证结果

2.6 RT-PCR检测部分差异表达基因在胃癌新鲜组织和相应癌旁组织中的表达

2.7 RT-PCR检测部分差异表达基因在人胃癌细胞株与人胃黏膜细胞株GES-1中的表达

3 讨论

3.1 CDX2与胃癌的联系

3.2 转染的载体和方法

3.3 基因芯片技术

3.4 芯片后的验证实验

4 结论

参考文献

附录

致谢

综述