sTRAIL及TRAIL受体在DNT细胞抑制胰腺癌细胞中的作用及意义

摘要

【目的】本课题组前期研究表明双阴性 T细胞（DNT）细胞对胰腺癌细胞有抑制作用，本研究旨在探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）结合其受体TRAIL-R1、TRAIL-R2在DNT细胞杀伤胰腺癌细胞中的作用及意义。
　　【方法】采用抗体吸附法培养从健康志愿者外周血中分离的DNT细胞，3-4天换液一次，第12天收获细胞。ELISA法检测体外扩增的过夜培养的DNT细胞上清液中的sTRAIL水平。采用qPCR、Western blot法分别从基因和蛋白水平检测TRAIL-R1、TRAIL-R2在6株胰腺癌细胞中的表达水平，免疫组织化学法检测48例来自安徽医科大学附属省立医院普外科手术治疗的胰腺癌组织及相应的癌旁组织标本中TRAIL-R1、TRAIL-R2的表达情况，并分析两种受体与临床病理参数之间的关系。
　　【结果】体外培养DNT细胞随着时间的推移数目逐渐增多，在第12天左右达到峰值。ELISA法检测发现实验组DNT细胞培养液中sTRAIL与对照组未含DNT细胞培养液相比浓度明显升高（t=27.24，P<0.05）。QPCR检测在6株胰腺癌细结果显示TRAIL-R1 mRNA在SW1990、PANC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、CFPAC-1和Capan-1的相对表达量分别为0.807、1、0.423、0.662、1.470和1.418；TRAIL-R2 mRNA在6株细胞中相对表达量低依次为0.744（SW1990）、1（PANC-1）、0.999（BXPC-3）、0.658（MIA PaCa-2）、1.949（CFPAC-1）和1.077（Capan-1）。Western blot法检测TRAIL-R1受体表达发现胰腺癌细胞系CFPAC-1表达最高，与之在同一水平上还有Capan-1细胞，在PANC-1和BXPC-3中较高，而SW1990、MIAPaCa-2细胞系中表达非常低甚至不表达；检测TRAIL-R2发现了同样的趋势，但其中TRAIL-R2在BXPC-3中未见明显表达。免疫组化发现TRAIL-R1在胰腺癌组及癌旁组的阳性表达率分别为48％，75%（χ2=7.43，P<0.05）；分析染色的强度胰腺癌组（23%）低于相应的癌旁组织中的阳性表达率（58%）（χ2=12.48，P<0.05）；进一步分析临床病理资料提示 TRAIL-R1的表达与胰腺癌的分化程度（χ2=8.60，P<0.05）及 T分级之间相关（χ2=7.26，P<0.05）即分化程度越低、T分级越晚TRAIL-R1表达水平越高。另外，我们在分析TRAIL-R2发现，其在胰腺癌组织中染色强度中强阳性率低于相应的癌旁组织(17%，35%，χ2=4.38，P<0.05），胰腺癌分化程度越低，肿瘤组织中的TRAIL-R2越低（χ2=7.704，P<0.05）。
　　【结论】外周血来源的DNT细胞可分泌sTRAIL，sTRAIL可与胰腺癌细胞和组织所表达的 TRAIL受体结合诱导细胞凋亡，可能是 DNT细胞抑制胰腺癌细胞增殖的机制之一。

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1.引言

2. 材料与方法

2.1 人外周血标本

2.2 组织标本

2.3 胰腺细胞株

2.4 主要试剂及材料

2.5 主要器材及仪器设备

2.6 主要溶液配制

2.7 实验方法

2.8 统计学处理

3. 结果

3.1 观察DNT细胞形态

3.2 sTRAIL在DNT细胞培养上清液中的表达

3.3 TRAIL-R1、TRAIL-R2 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达差异

3.4 6种胰腺癌细胞株中受体TRAIL-R1、TRAIL-R2表达差异

3.5 胰腺癌组织及癌旁组织中TRAIL-R1、TRAIL-R2的表达

3.6 TRAIL-R1、TRAIL-R2的表达与胰腺癌临床病理参数的关系

4 讨论

5 结论及有关问题

参考文献

附录

致谢

综述: DNT细胞在免疫治疗中的研究进展