非血缘脐血造血干细胞移植后CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群性质和功能的鉴定

摘要

目的：
　　探讨非血缘脐血造血干细胞移植（UCBT）术后NK细胞免疫重建的规律，进一步明确CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群的性质和功能。
　　方法：
　　本研究选择清髓性预处理方案处理的60例UCBT患者作为实验组，30例骨髓移植/外周血干细胞移植（BMT/PBSCT）治疗的患者作为病例对照组，21例健康体检者为正常对照组，用多色流式细胞仪检测造血干细胞移植（HSCT）后不同时间患者外周血 NK细胞亚群的数量和其表面CD11b、CD27、CD57分子的表达；并随机选择14例UCBT的患者，检测其表面活化性和抑制性受体的表达水平及颗粒酶、穿孔素和细胞内 TNF、IFN-γ的分泌水平；最后，对14例 UCBT患者外周血及骨髓中NK细胞表面表达的CXCR4分子进行检测，了解其趋化功能。
　　结果：
　　1.UCBT组患者外周血中NK细胞占淋巴细胞的百分比在2年内均低于PBSCT/BMT组，但两组NK细胞的绝对值仅在植入时和移植后1月时有差别；
　　2.UCBT与PBSCT/BMT及正常对照比较，UCBT组NK细胞中CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群的比例及绝对值在移植后4个月均异常增高(p<0.05)；
　　3.UCBT后CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群表面分子的表达：根据细胞表面CD11b、CD27分子的表达，CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群与CD3-CD16+CD56dimNK细胞亚群一致，都以CD11b+CD27-子集为主要组成（>80％），发育相对成熟，具有较强的杀伤功能；CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群表面CD57分子的表达在UCBT后3个月内显著低于CD3-CD16+CD56dimNK亚群（p<0.0001）；移植后4个月至2年内两亚群无明显差异。
　　4.UCBT受者CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群与CD3-CD16+CD56dimNK亚群相比:活化性受体NKG2D、NKp46和NKp30表达显著减低（p<0.01），NKP44表达无显著差异（p>0.05）；而抑制性受体NKG2A/CD94及CD158a表达也显著减低（p<0.05）,CD158b表达无显著差别（p>0.05）；CD3-CD16+CD56-NK细胞分泌的颗粒酶B和胞内TNF的表达显著低于CD3-CD16+CD56dimNK细胞（p<0.05），但是颗粒酶A、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达在两亚群间无显著差别。
　　5.CXCR4的表达：UCBT患者外周血和骨髓中CD3-CD16+CD56-NK亚群与CD3-CD16+CD56dimNK亚群细胞表面CXCR4的表达均无显著差异。与正常对照组比较，UCBT组NK细胞亚群表达的CXCR4分子水平显著增加（p<0.05）。
　　结论：
　　1.UCBT后免疫重建过程中NK细胞重建的早，其CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群的比例及绝对值在移植后免疫重建中明显升高；与具有细胞毒效应的CD3-CD16+CD56dimNK细胞亚群相比，CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群的分化程度及功能相关表型的表达显示该亚群亦处于相对成熟状态。
　　2.UCBT患者的CD3-CD16+CD56-NK细胞高表达CXCR4分子，是其趋化至肿瘤负荷部位发挥GVL作用的基础。
　　3.UCBT后CD3-CD16+CD56-NK亚群细胞的出现，并与CD3-CD16+CD56dimNK细胞亚群协同发挥细胞毒效应以增强移植后GVL作用；但该亚群的作用途径尚不清楚，分化的过程也有待于进一步阐明。

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1. 前言

1.1 造血干细胞移植的概念及重要作用

1.2 非血缘脐血移植的发展

1.3 非血缘脐血移植后移植物抗白血病（GVL）作用

1.4 NK细胞的分类

1.5 NK细胞功能作用的发挥

1.6 本研究的主要内容及目标

第一部分 非血缘脐血造血干细胞移植后患者CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群的性质研究

2.临床资料

3.材料与方法

4．结果

5．讨论

第二部分 非血缘脐血造血干细胞移植后患者CD3-CD16+CD56-NK细胞亚群趋化功能研究

1.临床资料

2.材料与方法

3.结果

4．讨论

6．结论

参考文献

附录

致谢

综述: 造血干细胞移植后免疫重建的研究进展