阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用及其机制的实验研究

摘要

第一部分阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期海马、脑干神经元保护作用的研究
　　目的：采用兔蛛网膜下腔出血后的动物模型，研究阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期海马及脑干神经元是否具有保护作用。
　　方法：完全随机将32只成年健康雄性新西兰大白兔(2~2.5kg)分成SAH组（n=8）、对照组（n=8）、SAH+安慰剂组（n=8）及SAH+阿托伐他汀治疗组（n=8）。应用开颅枕大池一次注血法模拟蛛网膜下腔出血动物模型。分别于出血后4h、16h、28h、40h分别灌服剂量为5mg/kg/次的阿托伐他汀，48h后处死新西兰大白兔。留取海马、脑干做标本。SAH建模成功后观察新西兰大白兔的行为功能变化，进行神经功能评分；分别采用TUNEL法检测海马、脑干神经元的凋亡；同时采用免疫组化法测定Bcl-2、Bax因子表达的变化；
　　结果：行为学观察发现与对照组相比，SAH组新西兰大白兔活动及饮食明显减少，其平均神经功能评分低，有显著统计学意义（P<0.01）；阿托伐他汀治疗组神经功能评分优于安慰剂组，差别有统计学意义（P<0.05）；凋亡细胞检测显示对照组中很少发现阳性细胞，SAH组阳性细胞明显增多（P<0.01），同时阿托伐他汀组阳性细胞数明显少于安慰剂组，安慰剂组与SAH组阳性细胞数无差别（P>0.05）；凋亡相关因子免疫组化检测发现：SAH组与对照组比较，脑干及海马区Bax、Bcl-2表达明显增加（P<0.05），阿托伐他汀组较安慰剂组Bax表达下降（P<0.05），Bcl-2表达增加（P<0.05）。安慰剂组较SAH组改善不显著（P>0.05）。
　　结论：1.蛛网膜下腔出血后48可观察到兔出现明显神经功能障碍并且脑干及海马区神经元出现明显凋亡；2.阿托伐他汀可明显抑制神经元的凋亡，对早期脑干、海马区神经元具有保护作用。
　　第二部分阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期脑水肿及AQP4表达的影响
　　目的：利用兔蛛网膜下腔出血动物模型模型，研究SAH早期脑水肿与AQP4表达的关系，并探讨阿托伐他汀对蛛网膜下腔出血早期脑水肿的影响及其机制。
　　方法：32只成年健康雄性新西兰大白兔(2~2.5kg)被随机分成SAH组（n=8）、对照组（n=8）、SAH+安慰剂组（n=8）及SAH+阿托伐他汀治疗组（n=8）。应用开颅枕大池一次注血法模拟蛛网膜下腔出血动物模型。分别于出血后4h、16h、28h、40h分别灌服阿托伐他汀，剂量为5mg/kg/次，48h后处死新西兰大白兔。留取整个大脑半球做标本。采用干湿重法测定脑组织含水量；采用Western blot法测定AQP4的表达情况以及通过尼氏染色了解神经元凋亡情况；
　　结果：SAH后早期脑水肿明显，SAH后48小时脑组织含水量达82.16％，同时测得AQP4的含量较高；与对照组比较脑组织含水量及AQP4的表达明显增加（P<0.01）；阿托伐他汀治疗组的含水量为80.13%，AQP4的含量较安慰剂组明显下降（P<0.01）；而安慰剂组与对照组比较无明显差别（P>0.05）；SAH组神经元凋亡较对照组明显增多而与安慰剂组比较无差异，而SAH+阿托伐他汀组神经元凋亡较安慰剂组少，有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：1.蛛网膜下腔出血后早期即可产生脑水肿，且和AQP4的表达及神经元凋亡呈正相关；2.应用阿托伐他汀治疗蛛网膜下腔出血可明显降低AQP4的表达且可改善血脑屏障减轻早期脑水肿。
　　第三部分阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期脑血管的保护作用
　　目的：利用蛛网膜下腔出血的动物模型，探讨阿托伐他汀对蛛网膜下腔出血早期脑血管是否具有保护作用。
　　方法：将24只成年健康雄性新西兰大白兔(2~2.5kg)随机分成SAH组（n=8）、对照组（n=8）及SAH+阿托伐他汀治疗组（n=8）。应用开颅枕大池一次注血法模拟蛛网膜下腔出血动物模型，对照组给予开颅去除颅骨但不注动脉血，SAH组开颅注入自体动脉血1ml/kg，阿托伐他汀组给予口服阿托伐他汀5mg/kg/次，分别于出血后4h、16h、28h、40h分别灌服阿托伐他汀，48h后处死新西兰大白兔，留取基底动脉、颞叶皮层、脑干等组织做标本，免疫组化法测定测定基底动脉中vWF及TM的表达情况，RT-PCR测定血管内皮细胞中vWF及TM的mRNA的表达，HE染色测定基底动脉血管内径周长与管壁厚度比值即T值（D/A）。
　　结果：RT-PCR结果显示对照组的vWF及TM的mRNA的表达水平较弱，SAH组较对照组比较其vWF及TM的mRNA的表达明显增加（P<0.01）；阿托伐他汀治疗组vWF及TM的mRNA的表达明显低于SAH组（P<0.01）。免疫组化结果显示对照组中vWF及TM的表达阳性率较低；与对照组相比，SAH组vWF及TM的阳性率明显增加；阿托伐他汀治疗组vWF及TM的表达阳性率低于SAH组。HE染色结果显示SAH组较对照组比较，基底动脉内径周长与管壁厚度比（T值）明显降低（P<0.01）；阿托伐他汀组T值明显高于SAH组（P<0.01）。
　　结论：1.SAH早期即可引起脑血管痉挛以及血管内皮细胞自我调节功能障碍；2.阿托伐他汀可以保护血管内皮细胞，减轻血管痉挛；3.阿托伐他汀保护血管内皮细胞以及促进血管内皮细胞增生的机制可能与抑制vWF及TM的表达有关。

目录

封面

声明

目录

中英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期海马、脑干神经元保护作用的研究

1，引言

2，材料与方法

3, 结 果

4，讨 论

5，结 论

参考文献

第二部分 阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期脑水肿及AQP4表达的影响

1，引言

2，材料与方法

3，结 果

4，讨 论

5，结 论

参考文献

第三部分 阿托伐他汀对兔蛛网膜下腔出血后早期脑血管的保护作用

1，引言

2，材料与方法

3，结 果

4，讨 论

5，结 论

参考文献

综述:阿托伐他汀治疗蛛网膜下腔出血的机制及研究进展

附录

个人简历

攻读硕士学位期间发表学术论文情况

致谢