反复降调节E2高水平患者的IVF结局及卵巢microRNA表达图谱的研究

摘要

【背景】
　　基础E2被视为评价卵巢储备能力的指标之一，卵巢功能减退早期E2可先于FSH一年表现为水平升高，临床常被作为预测控制性超促排卵（COH）中卵巢反应的参考。然而在临床实践中会遇到一些基础E2高水平，且经反复降调节后仍不能达到降调节标准的患者。卵巢是人体合成E2的主要器官，卵巢承载着女性生殖内分泌的主要器官。而 microRNA（miRNA）作为真核生物体内重要的小 RNA调控分子，广泛参与女性卵泡生长、发育成熟、受精、着床及早期胚胎发育等过程，从而对维持女性正常生育功能起到至关重要的作用。
　　【目的】
　　对6例基础雌二醇（E2）高水平且经反复降调后E2不达标患者的临床资料进行回顾性分析，以探讨其病因、治疗措施及助孕效果。绘制人类卵巢miRNA的表达图谱，描绘miRNA在卵巢生理过程，探索miRNA如何参与生物合成及调控的过程，进而为进一步对miRNA的科学研究及临床实践提供参考及思路。
　　【方法】
　　（1）临床资料的回顾性分析回顾性分析2012年1月至2014年8月间于我生殖医学中心行IVF治疗患者中基础E2水平升高的267例患者的IVF临床资料，其中6例行长效长方案反复降调节E2水平难以达到降调标准。将同期我中心行长方案助孕的患者的临床结局进行比较研究。
　　（2）人类卵巢miRNA的实验研究
　　1）收集正常人的卵巢皮质区组织，并制备皮质区组织细胞小RNA cDNA文库，利用Illumina测序技术和CPSS工具对小RNA进行深度测序和数据分析。
　　2）绘制卵巢皮质区组织细胞 miRNA的表达图谱（包括新发现的miRNA即novel miRNA）。
　　3）利用生物信息学软件对高表达的前十位miRNA的下游靶基因进行预测，进而运用Gene Ontology（GO）、Pathway analysis等软件对其潜在的下游调控通路进行富集和筛选。
　　4）在预测和筛选的基础上，运用实时定量RT-PCR对前十位高表达的miRNA及novel miRNA及其下游靶标进行实验验证。
　　【结果】
　　（1）临床资料的回顾性分析基础E2水平升高的267例中6例行长效长方案反复降调节E2水平难以达到降调标准患者，其中4例直接超排者2例获得临床妊娠；1例改行微刺激方案者，获得临床妊娠；1例改行来曲唑（LE）继续治疗后行促排治疗者，获得临床妊娠。261例唯基础 E2高水平且垂体降调节达标者的临床妊娠率为35.29％（78/221），流产率7.69%(6/78)，OHSS发生率15.33%(40/261)。同期行长方案的患者临床妊娠率49.72%，流产率9.82%，OHSS发生率2.79%。
　　（2）人类卵巢miRNA的实验研究
　　1）深度测序结果显示，有762种已知miRNA和492种新发现的miRNA在正常人卵巢皮质区组织细胞中表达。经过qRT-PCR验证，前10条高表达的miRNA及novel miRNA的相对含量与测序结果相一致。
　　2）GO和Pathway分析发现，前10条高表达的miRNA参与氨基酸代谢、免疫调节、激素调控、细胞分化、神经发育和调节等多条信号通路。
　　【结论】
　　（1）对于经反复降调后雌激素不能达标者进行个体化的促排卵治疗方案可获得妊娠，同时要积极寻找病因避免不良反应的发生。
　　（2）通过对人类卵巢上皮细胞中miRNA图谱的绘制，发现其参与了氨基酸代谢、免疫调节、激素调控、细胞分化、神经发育和调节等多条信号通路的实现。

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英文缩略词表

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1.前言

2.材料与仪器

2.1 主要仪器设备

2.2 主要试剂

2.3 主要耗材

3.研究方法

3.1 反复降调节E2高水平患者临床资料的回顾性分析

3.2 人类卵巢中miRNA的实验研究

4.结果

4.1 临床资料表

4.2 人卵巢miRNA的实验研究

5.讨论

6.结论

参考文献

附录

致谢

综述： MicroRNA与性激素