ESE1通过影响转录因子NF-κB的活性促进LPS侧脑室注射模型中小胶质细胞活化及神经元凋亡

摘要

目的：研究 ESE1在脂多糖(LPS)诱导的大鼠中枢神经系统炎症模型中的表达，并探讨ESE1参与小胶质细胞活化以及神经元凋亡的机制。
　　方法：
　　1.整体水平，建立大鼠侧脑室注射脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）的神经炎症模型；取54只Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠，随机分为两组：LPS注射组（48只）和假手术组（6只）。通过蛋白质印迹法（Western Blot, WB）和免疫组织化学染色法（immunohistochemistry，IHC）检测LPS注射后ESE1的表达和细胞类型定位变化。
　　2.通过免疫荧光双标记法（double-immunofluorescent staining，IF）检测ESE1在LPS注射后与不同细胞的共定位情况。
　　3.通过WB检测LPS注射后iNOS、cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2的表达，并通过IF分别检测iNOS/Iba-1、iNOS/ESE1、NeuN/cleaved-capase-3、ESE1/cleaved-caspase-3的共定位情况，以明确ESE1与小胶质细胞活化及神经元凋亡的关系。
　　4.细胞水平，建立脂多糖诱导的小胶质细胞活化模型，通过WB检测iNOS以及ESE1的表达变化，并通过ELISA检测促炎细胞因子的释放，以及荧光素酶报告基因检测NF-κB的转录活性确定ESE1对小胶质细胞活化的影响。同时，也构建小胶质细胞活化培养基（condition medium, CM）诱导的神经元凋亡模型，通过WB检测cleaved-caspase3以及ESE1的表达变化，以及LDH释放实验确定ESE1对神经元凋亡的影响。
　　结果：
　　1.LPS侧脑室注射后，大脑皮质ESE1表达上调，在1d后达到高峰，随后降低。
　　2.ESE1分别与小胶质细胞以及神经元共定位，并且ESE1与其共定位数目增加。
　　3.LPS注射后，cleaved-caspase3、以及iNOS表达上调，达到峰值后，随后下降；并且iNOS/Iba-1、iNOS/ESE1、NeuN/cleaved-capase-3、ESE1/cleaved-caspase-3定位增加。
　　4．在小胶质细胞中敲低ESE1的表达能明显降低iNOS的表达，以及促炎细胞因子的释放，以及NF-κB的转录活性明显降低。
　　5.在神经元细胞中，敲低 ESE1的表达能明显降低 CM引起的神经元中cleaved-caspase3以及Bcl-2的水平，同时降低CM引起的LDH释放。
　　结论：
　　ESE1在LPS诱导的中枢神经系统中表达上调，其表达变化主要存在于小胶质细胞以及神经元中，而非星形胶质细胞。在中枢神经系统中，ESE1通过影响NF-κB的转录活性，影响小胶质细胞活化以及神经元的凋亡。

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中文摘要

英文摘要

1 引言

1.1课题来源，研究的目的和意义

1.2国内外研究概况

1.3论文的主要研究内容

2 材料与方法

2.1 实验动物仪器设备

2.2实验流程与方法

3 结果

3.1 LPS诱导ESE1与小胶质细胞以及神经元共定位增加

3.2 ESE1参与LPS诱导的小胶质细胞活化

3.3 ESE1参与LPS诱导的CNS炎症模型中的神经元凋亡的调节

4 讨论

5 结论

英文缩略词表

参考文献

附录

在攻读博士学位期间发表的论文

致谢

综述:中枢神经系统小胶质细胞活化的机制以及意义

摘要：

介绍：

神经退行性疾病以及损伤中小胶质细胞的研究进展

小胶质细胞活化的机制

展望

综述参考文献