纳米颗粒NP-PPE/Ce6辅助的光动力学疗法有效治疗胰腺癌的研究

摘要

目的：为了改善光动力学疗法对胰腺癌的治疗效果，本研究将 NP-PPE/Ce6纳米颗粒视为荷载二氢卟吩 e6的药物输送系统，探索了经过 NP-PPE/Ce6纳米颗粒改良的光动力学疗法改善胰腺癌治疗效果的情况，为临床上胰腺癌的有效治疗提供新途径。
　　方法：用两亲性聚合物与光敏剂Ce6在水溶液中通过自组装的方式制备了纳米颗粒NP-PPE/Ce6。利用动态光散射仪检测了NP-PPE/Ce6的尺寸分布和其稳定性；运用透射电子显微镜观察了NP-PPE/Ce6大小和形貌。分别通过荧光分光光度计和HPLC检测了NP-PPE/Ce6中被荷载的光敏剂Ce6的释放行为。实验用DCFH-DA作为指示剂检验了NP-PPE/Ce6在细胞外水平和细胞水平产生活性氧的能力。运用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察了 BxPC-3胰腺癌细胞对 NP-PPE/Ce6的摄取行为。NP-PPE/Ce6在细胞水平的细胞毒性实验采用了MTT实验和台盼蓝染色法来检测。为了检测 NP-PPE/Ce6在体内被清除及组织分布和富集的情况，实验采用 HPLC和小动物成像仪。最后通过观察治疗后的肿瘤体积变化验证动物活体研究NP-PPE/Ce6对胰腺癌BxPC-3的生长抑制作用；并将治疗后的小鼠肿瘤组织游离下来制成病理切片，对各组的细胞增殖PCNA信号及凋亡TUNEL信号进行检测。
　　结果：1.基于细胞水平NP-PPE/Ce6辅助光动力学疗法治疗胰腺癌的研究：（1）首先，我们成功制备了荷载光敏剂Ce6的纳米颗粒NP-PPE/Ce6，并通过相关仪器和方法检测了其理化性质，最后结果显示NP-PPE/Ce6是尺寸为44.4±4.3nm，粒径分散度（PDI）为0.108的球形颗粒。其稳定性良好，在pH为5.5的酸性环境中被荷载的光敏剂从纳米颗粒中释放出来的速度明显加快且检测到的指示活性氧产量的DCF荧光信号亦增强；（2）在细胞水平，胰腺癌细胞BxPC-3对NP-PPE/Ce6具有摄取优势，NP-PPE/Ce6在促进细胞对光敏剂的摄取的同时，用NP-PPE/Ce6处理过并经光照的胰腺癌细胞其内被检测到的活性氧相较于游离光敏剂处理的明显增多。且细胞毒性实验和凋亡细胞检测皆说明NP-PPE/Ce6有效提高了光动力学疗法杀死胰腺癌细胞的作用。
　　2.基于动物水平 NP-PPE/Ce6辅助光动力学疗法治疗胰腺癌的研究：结果发现NP-PPE/Ce6表现出了延长光敏剂Ce6的血液清除率、促进了组织对光敏剂Ce6的富集的作用；最后通过观察治疗后的肿瘤生长情况揭示NP-PPE/Ce6处理并加光照后的荷瘤老鼠的肿瘤生长明显受到抑制，其体积相较于治疗前减少了60％。最后摘取的肿瘤组织经称重亦显示NP-PPE/Ce6处理加光照的肿瘤组织的平均重量仅分别为经NP-PPE/Ce6未加光照组和游离光敏剂Ce6处理加光照组的1/3和1/2。在进行肿瘤细胞的增值与凋亡研究中发现，NP-PPE/Ce6联合光照的肿瘤组织中通过免疫组化检测到的凋亡信号相较于其他组明显增强，而增殖信号却明显减弱。
　　结论：NP-PPE/Ce6纳米颗粒作为光敏剂的输送系统，它有效延长了光敏剂的血液清除时间，增加了肿瘤组织富集及有效降低了毒副作用。经NP-PPE/Ce6处理加近红外光照的操作增强了对 BxPC-3胰腺癌肿瘤的生长抑制，这说明 NP-PPE/Ce6纳米载体作为光敏剂的输送系统在光动力疗法有效治疗胰腺癌的研究中具有很大的潜能。

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第一部分 纳米颗粒NP-PPE/Ce6辅助的光动力学疗法对BxPC-3胰腺癌细胞的杀伤作用

1引言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

5结论

参考文献

第二部分 纳米颗粒NP-PPE/Ce6辅助的光动力学疗法对荷载BxPC-3细胞的胰腺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用

1 引言

2 材料与方法

3.结果

4 讨论

5 结论

参考文献

小结

实验的创新之处

展望与不足

附录

致谢

综述:光动力学疗法应用于胰腺癌治疗的研究现况