维生素D对糖皮质激素免疫抑制模型小鼠的免疫调节作用

摘要

目的：通过观察维生素D对糖皮质激素诱导的免疫抑制模型小鼠免疫学指标的影响，探讨维生素D对免疫功能低下的调节作用及部分机制。
　　方法：实验小鼠随机分成5组：对照组、模型组和维生素 D低、中、高剂量组。模型组小鼠连续3天腹腔注射地塞米松（25 mg/kg体重）建立免疫抑制小鼠模型，对照组小鼠连续3天腹腔注射与地塞米松相同体积的注射用水；低、中、高剂量组小鼠在建立模型的基础上，于腹腔注射地塞米松的第一天，同时分别给予三个不同剂量（4、6、10 IU/g体重）1,25(OH)2D3灌胃处理，模型组和对照组于注射的第一天，同时灌胃给予0.2ml的注射用水，连续7天；。于实验的第8天，小鼠称重，摘眼球取血，EDTA抗凝，然后断颈处死小鼠，无菌取脾和胸腺，分别称重，计算小鼠胸腺、脾脏指数；制备脾细胞悬液，经过刀豆素 A（T淋巴细胞活化剂）刺激后，采用 MTT法检测小鼠脾脏 T淋巴细胞增殖指数，同时吸取细胞培养上清，采用酶联免疫吸附实验检测白细胞介素-2的浓度；采用全自动血细胞分析仪检测小鼠外周血白细胞总数及分类，采用流式细胞术检测外周血 T淋巴细胞及其亚群、B淋巴细胞及NK细胞的百分比。
　　结果：
　　1.模型组小鼠胸腺指数、脾脏指数、脾脏淋巴细胞增殖指数、外周血淋巴细胞百分比、脾脏T淋巴细胞产生白细胞介素-2的能力及外周血B淋巴细胞、除NK T淋巴细胞以外的T淋巴亚群均明显低于对照组，而NK T淋巴细胞百分比与对照组相比明显增高。
　　2.维生素D不同剂量组小鼠胸腺指数均明显高于模型组，并且随着剂量增高，胸腺指数有增高的趋势；而给予不同剂量的维生素D对小鼠的脾脏指数无明显影响。3.维生素D中剂量组淋巴细胞增殖指数明显高于模型组，但仍低于对照组的增殖指数；维生素D低剂量组和维生素D高剂量组与模型组相比较，增殖指数无明显差异。
　　4.维生素D中剂量组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中白细胞介素-2的浓度明显高于模型组；但维生素 D低剂量组和维生素 D高剂量组与模型组相比，白细胞介素-2水平无明显差异。
　　5．维生素D中剂量组外周血淋巴细胞数量明显高于模型组；而白细胞是随着维生素D使用药剂量的增加而逐渐升高。
　　6.维生素D低剂量组外周血B淋巴细胞百分比明显高于模型组。维生素D中剂量组及维生素D高剂量组与模型组无明显差异。
　　7.维生素 D低剂量组外周血自然杀伤细胞百分比与模型组相比有增高的趋势。而维生素 D高剂量组自然杀伤细胞百分比明显低于模型组。当维生素 D给药剂量增加时，自然杀伤细胞百分比有降低的趋势。
　　8.维生素D低剂量组CD4+淋巴细胞百分比低于模型组，随着维生素D给药剂量的增加， CD4+淋巴细胞百分比逐渐增高。维生素D低剂量组的CD8+淋巴细胞百分比较模型组明显降低。维生素D中剂量组与维生素D高剂量组CD4+/CD8+值较模型组明显升高，而维生素 D低剂量组与模型组不具有明显差异，随维生素 D给药剂量增高，CD4+/CD8+值也随之增高。
　　结论：维生素D可以改善糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠的免疫功能，不同剂量的维生素D对免疫调节作用存在差异，其中，中等剂量（6IU/g）维生素D补充对免疫功能的调节作用最强；进一步增高维生素D剂量对免疫的调节作用相对减弱。总之，维生素 D可以促进免疫功能低下小鼠免疫功能的恢复，可能通过调节T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子如白细胞介素-2的水平对免疫功能进行调节。

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1 前言

2 实验材料

2.1 动物

2.2 药物与试剂

2.3 主要实验仪器

3 实验方法

3.1 糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠模型的建立

3.2 实验动物分组及给药方

3.3 小鼠体重、胸腺指数、脾脏指数的测定

3.4 小鼠脾脏淋巴细胞增殖指数测定

3.5 细胞因子IL-2的测定

3.7 B、NK、T淋巴细胞亚群的测定

3.6 外周血白细胞数量检测

3.8 统计学处理

4 结果

4.1 维生素D对小鼠体重、胸腺指数、脾脏指数的影响

4.2 维生素D对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

4.3 维生素D对细胞因子IL-2分泌的影响

4.4 维生素D对小鼠外周血白细胞及淋巴细胞数量的影响

4.5 维生素D对小鼠外周血T淋巴细胞亚群百分比及比值影响

4.6 维生素D对小鼠外周血B淋巴细胞百分比的影响

4.7 维生素D对小鼠外周血NK细胞百分比的影响

5 讨论

5.1 维生素D对小鼠胸腺指数、脾脏指数的影响

5.2 维生素D对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响

5.3 维生素D对细胞因子IL-2分泌的影响

5.4 维生素D对小鼠外周血白细胞及淋巴细胞总数量的影响

5.5 维生素D对小鼠外周血T淋巴细胞亚群百分比及比值影响

5.6 维生素D对小鼠外周血B淋巴细胞百分比的影响

5.7 维生素D对小鼠外周血NK细胞百分比的影响

5.8 维生素D的不同剂量对免疫调节作用

6 结论

参考文献

附录

致谢

综述:维生素D对免疫细胞的调节作用