胰岛素对糖尿病大鼠下颌下腺组织学及神经元型一氧化氮合酶和神经营养因子-3表达的影响及意义

摘要

目的：
　　(1)观察糖尿病大鼠下颌下腺的光镜及超微结构变化；（2）观察糖尿病大鼠下颌下腺内神经元型一氧化氮合酶（Neuronal Nitric Oxide Synthase，nNOS）和神经营养因子-3（Neurotrophin-3，NT-3）的表达变化；（3）观察胰岛素治疗对糖尿病大鼠下颌下腺的组织学及nNOS和NT-3表达的影响。
　　方法：
　　48只SD雄性大鼠随机分为:对照组、糖尿病组和治疗组，每组16只，糖尿病组和治疗组给予高脂饮食喂养2个月，产生胰岛素抵抗和糖耐量降低后，腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotococin，STZ）复制2型糖尿病动物模型，同时治疗组给予胰岛素治疗，于造模后3个月和6个月每组分别处死8只大鼠。于造模前和处死前，各组大鼠均测量体质量，经尾静脉或腹腔采血检测空腹血糖和血脂(甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白)水平，并取大鼠下颌下腺组织，分别进行以下处理：HE染色、电镜观察、苦味酸天狼星红染色、免疫组织化学染色和用计算机图像分析软件分析各组大鼠在显微镜200×视野下胶原纤维所占面积的百分比、nNOS和NT-3的平均光密度值。
　　结果：
　　(1)体质量:对照组随时间的延长体质量增加；糖尿病组造模后体质量较造模前无差异，但较同期对照组均下降；治疗组造模后体质量较造模前及同期糖尿病组增加，且造模3个月较同期对照组增加。(2)血糖:糖尿病组造模后血糖增高且随病程的延长显著，并较同期对照组升高；治疗组造模后血糖随病程的延长增高，且较同期糖尿病组下降，同期对照组升高。(3)血脂：糖尿病组造模后血脂增高且随病程的延长显著，并较同期对照组升高；治疗组造模后血脂较造模前及同期对照组升高，较同期糖尿病组下降，且甘油三酯在造模6个月高于造模3个月。(4)HE染色：与对照组相比，糖尿病组随着病程的延长，下颌下腺腺泡萎缩加重，颗粒曲管数目减少，管腔变窄，顶部胞质内嗜酸性分泌物减少，治疗组较对照组无明显变化。(5)电镜观察：糖尿病组出现线粒体嵴断裂和空泡变性，粗面内质网扩张改变，并随着病程延长加重；治疗组在造模6个月时线粒体、粗面内质网病变轻微。(6)苦味酸天狼星红染色：糖尿病组下颌下腺内胶原纤维较对照组明显增多且随病程的延长显著；治疗组较同期糖尿病组减少，在造模6个月较对照组增多。(7)免疫组织化学染色：①nNOS：糖尿病组表达较同期对照组增强，在造模3个月表达最强；治疗组表达较同期糖尿病组下降。②NT-3：糖尿病组表达较对照组降低且随病程的延长减少；治疗组较同期糖尿病组表达增强。(8)计算机图像分析结果：①胶原纤维所占面积百分比：糖尿病组在造模3个月和造模6个月间及其与同期对照组间比较均有差异（p<0.05）；治疗组在造模3个月，较同期糖尿病组有差异(p<0.05)，在造模6个月，较造模3个月及同期糖尿病组、对照组均有差异(p<0.05)。②nNOS和NT-3的平均光密度值：糖尿病组在造模3个月和造模6个月间及其与同期对照组间比较均有差异(p<0.05)；治疗组较同期糖尿病组间比较均有差异(p<0.05)。
　　结论：
　　(1)本实验成功复制2型糖尿病动物模型。(2)糖尿病组大鼠下颌下腺出现结构紊乱，nNOS表达升高和NT-3表达下降现象。(3)胰岛素治疗能使下颌下腺的结构趋于正常，nNOS表达较糖尿病组降低， NT-3表达较糖尿病组升高。此实验为探索糖尿病对下颌下腺生物活性物质分泌的影响以及糖尿病并发症的可能机制提供了形态学依据。

目录

声明

英 文 缩 略 词 表

1 引言

2 材料和方法

2.1溶液配置

2.2 主要试剂

2.3仪器设备

2.4 糖尿病模型和标本制备

2.5电镜制备

2.6 HE染色

2.7 苦味酸天狼星红染色

2.8免疫组织化学染色

2.9计算机图像分析和数据处理

3 结果

3.1 体质量

3.2 血糖检测结果

3.3血脂检测结果

3.4 HE染色结果

3.5 电镜观察结果

3.6 苦味酸天狼星红染色

3.7 免疫组织化学染色结果

4讨论

4.1下颌下腺的生物学功能及其与糖尿病关系

4.2 糖尿病大鼠下颌下腺的形态学变化及意义

4.3糖尿病大鼠下颌下腺内nNOS及NT-3表达变化及意义

4.4胰岛素对糖尿病大鼠下颌下腺内nNOS及NT-3表达影响及意义

5 结论

参考文献

附录

致谢

文献综述:糖尿病与下颌下腺内生物活性物质