地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔的保护作用及其机制研究

摘要

肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）的临床表现可以概括为“三高一低”，即高蛋白尿、高血脂、高度水肿、低血蛋白。原发性的NS以肾小球肾病最为常见，发生与双侧肾脏肾小球，病因各不相同。地塞米松（dexamethasone，Dex）为糖皮质类激素的代表药物，具有强大的抗炎、抗毒、抗过敏等作用，临床应用广泛，同时对下丘脑-垂体-肾上腺轴（the hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA）抑制作用较明显。地塞米松可以抑制肾内的炎性反应，缓解一系列的症状，治疗方法为开始大剂量静脉给药后期口服维持治疗。长期使用易产生较严重的毒副作用，治病的同时也给治疗过程中的病人增加痛苦。所以，我们设想对于肾病的治疗，若使药物在肾脏局部浓度高，而在全身的血药浓度低，是否不仅可以增加疗效，又能减轻毒副作用。故本实验使用的药物剂型为地塞米松缓释剂(sustained-release of dexamethasone，SR Dex)，药物到达局部后，缓慢释放，维持时间长。使用的动物模型为耳缘静脉注射藏红花红 O（safranine O）诱导的家兔肾小球肾病，藏红花红O能选择性的引起近端和远端肾小管上皮细胞广泛坏死，形成的肾病模型与临床表现较为一致。
　　目的：探讨地塞米松缓释剂对藏红花红 O肾病家兔的保护作用、对 HPA轴和肾上腺功能的影响及糖皮质激素类药物治疗肾病的可能机制。
　　方法：家兔肾病模型的制备方法为连续两次间隔3小时耳缘静脉注射臧红花红O，每次15mg。地塞米松缓释剂分别采用手术肾囊内一次性注射给药（1.48，0.74，0.37 mg/kg），阳性对照组地塞米松灌胃给药（0.4mg/kg，qd×8w）。每天观察造模前及造模后家兔一般状况，每周检测体重、24h尿蛋白，每周检测血蛋白（总蛋白、白蛋白）、血脂（总胆固醇）、血肾功能（血肌酐、尿素氮）、血尿酸及血电解质（NA+、K+、Cl–），每两周检测肾上腺功能指标（血液指标：促肾上腺皮质激素、皮质酮、尿液指标：17-羟基皮质类固醇）。HE染色观察肾、肾上腺组织的病理学变化；PAS染色观察肾小球系膜(glomerular mesangum，GB)、基底膜（glomerulus basement membrane，GBM）的形态改变；SR染色观察肾间质胶原纤维的变化；免疫组织化学法检测肾组织nephrin、TRPC6蛋白的表达；实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测肾组织nephrin、TRPC6 mRNA的表达量。
　　结果：地塞米松缓释剂可显著降低肾病家兔升高的尿蛋白，改善肾功能（降低血尿素氮和血肌酐），降低血总胆固醇及尿酸水平，升高血总蛋白、白蛋白，改善肾组织病理学变化。另外，地塞米松缓释剂对肾病家兔血促肾上腺皮质激素和皮质酮含量无明显影响，可不同程度降低尿17-羟基皮质类固醇含量，对肾上腺病理组织学也无明显影响。
　　结论：地塞米松缓释剂肾囊用药对家兔藏红花红O肾病具有较好的保护作用，其机制可能与改变TRPC6蛋白通路及nephrin蛋白的表达与分布，改善肾小球滤膜的完整性有关。另外，地塞米松缓释剂肾囊用药对HPA轴无明显抑制，对肾上腺形态及功能未见明显影响。

目录

声明

英文缩略词对照表 (Abbreviation)

1 前言

2 实验材料

2.1实验动物

2.2 药品与试剂

2.3 实验仪器

3 实验方法

3.1 模型的制备

3.2 地塞米松缓释剂给药方法

3.3 实验分组及指标检测

3.4 基本情况

3.5 尿液指标的检测

3.6 血肌酐（Creatinine，Cr）和尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）的测定

3.7 血清总蛋白（Total protein，TP）和白蛋白（Albumin，ALB)的测定

3.8 血脂（Total cholesterol，TC)的测定

3.9 血尿酸（Uric acid，UA)的测定

3.10 血电解质的测定

3.11肾组织病理学观察

3.12 免疫组化法检测家兔肾组织蛋白表达水平

3.13 Real-time PCR检测肾组织Nephrin、TRPC6 mRNA水平的表达。

3.16 统计学处理

4 实验结果

4.1 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔基本情况的影响

4.2 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔体重的影响

4.3 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔24h尿蛋白的影响

4.4 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔尿比重的影响

4.5 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血肌酐的影响

4.6 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血尿素氮的影响

4.7 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血总蛋白的影响

4.8 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血白蛋白的影响

4.9 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血总胆固醇的影响

4.10 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血尿酸的影响

4.11 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔血电解质（K+、Na+、Cl-）的影响

4.12 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔肾组织病理学的影响

4.13 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔肾组织nephrin表达的的影响

4.14 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔肾组织TRPC6表达的的影响

4.15 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔肾组织nephrin、TRPC6 mRNA表达的的影响

4.16 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔HPA轴功能的影响

4.17 地塞米松植入剂肾囊植入对藏红花红O肾病家兔肾上腺病理学的影响

5 讨论

5.1肾病模型构建

5.2 地塞米松缓释剂对藏红花红O肾病家兔的保护作用

5.3 保护作用的机制

5.4 对HPA轴的影响

5.5 对肾上腺病理的改变

6 结论

参考文献

附录

致谢

综述:TRPC6概述及其与肾病尿蛋白的研究进展