体外常温机械灌注对动物肝脏保存的探讨

摘要

第一部分猪肝脏体外机械灌注系统的建立
　　目的：建立猪的肝脏体外灌注系统并对其功能进行评价。有效的延长离体肝脏在体外保存的时间并起到一定的修复作用。了解没有红细胞的培养基是否能够对猪肝脏进行体外灌注培养。方法：实验动物为巴拿马小型猪，体重在4-5kg之间，雌雄不拘。猪肝脏经过30Min缺血和30分钟冷灌注，之后猪肝脏离体并接入体外常温灌注系统并维持6小时。灌注液由标准的RPMI1640和10%小牛血清经过氧合配置而成。结果：灌注过程中肝脏持续有胆汁分泌，各项生化指标均在参考范围，肝脏组织常规病理切片未见明显结构破坏。结论：没有红细胞或者血红蛋白的灌注液是可以对猪肝脏进行体外灌注培养的。
　　第二部分常温机械灌注中氧气对大鼠肝脏胆道上皮增殖的影响
　　目的：研究了氧气对 DCD大鼠肝脏胆道上皮细胞增殖的影响。方法：十二大鼠肝脏 DCD计划分为两组。对照组大鼠肝脏离体过程中没有氧气供应的灌注。实验组大鼠肝脏离体过程中则予以充分氧合的灌注液灌注。之后所有肝脏被连接到一个体外常温机械灌注系统，灌注液中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU),作为细胞增殖的标志。经过6小时体外常温机械灌注，通过比较两组胆管上皮形态、病理和BrdU复制情况进行评估。结果：我们发现实验组的大约4.5%的胆道上皮细胞出现增殖，只有而对照组只有0.4%细胞出现阳性增殖细胞。且两组标本在细胞病理形态结构上无显著变化。结论：因此,我们的结果表明,氧气供应所需的维护在肝移植胆道上皮细胞的生理功能和显示氧气供应肝脏隔离和非原位肝脏器官培养可以提高在肝移植中胆道上皮细胞损伤的修复。

目录

声明

缩略词表

前言

第一部分 猪肝脏体外机械灌注系统的建立

Abstract

引言

方法与材料

1、实验动物

2、仪器设备

3、体外灌注系统的灌注液成分和ESLC系统组成部件

4、取肝手术步骤

5、肝脏体外常温灌注系统

6、ESCL系统观察和检测的指标

7、组织标本HE染色

8、统计分析

结果

1、肝脏耗氧量

2、肝功能

3、胆汁

4.常规病理学检查

讨论

1.灌注液成分的选择

2.常温机械灌注中血流动力学及温度参数的控制

3.胆汁产量

4.肝脏酶学的变化

5.尿素产量

6.肝脏组织病理学检

结论

参考文献

第二部分 常温机械灌注中氧气对大鼠肝脏胆道上皮增殖的影响

Abstract

引言

材料和方法

1、实验动物

2、主要仪器设备与试剂

3、分组与设计

4、肝脏离体步骤

5、肝脏耗氧量的测量

6、肝脏体外培养系统（ESLC）接入

7、肝组织胆管组织HE染色

8、BrdU 免疫组化分析

9、统计分析

结果

1、在不同温度下的耗氧量

2、氧气对肝脏形态结构的影响

3、ESLC中胆道细胞增殖

讨论

1.氧气与温度

2. 氧气与胆道上皮细胞增殖

结论

参考文献

个人简介

致谢

综述:肝脏常温机械灌注的应用进展