慢性扁桃体炎疾病中IL-4、TNF-α、Foxp3、CTLA-4的表达及临床意义

摘要

研究背景及目的：慢性扁桃体炎（chronic tonsillitis，CT）常起因于扁桃体急性炎症反复发作或扁桃体隐窝引流不畅，窝内病毒细菌滋生感染[1]。扁桃体肥大（tonsillar hypertrophy，TH）即腺样体肥大，是发生在咽扁桃体的生理性或病理性的增生肥大，反复炎症刺激、咽部感染、营养不良、急性传染病和体质等是其诱发因素[3]，尤其在寒冷、潮湿和气候多变的地区多发。本文研究的对象是慢性扁桃体炎和扁桃体生理性肥大的患者。本研究主要通过检测白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、叉头蛋白转录因子-3（forkhead box P3，Foxp3）和细胞毒T淋巴细胞抗原-4（Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen4，CTLA-4）在CT组和TH组扁桃体组织中的表达差异与分布特征，并探讨他们在CT发病发展过程中可能发挥的免疫学作用和机制。
　　方法：从安徽医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科接受扁桃体全切术的患者中收取CT患者扁桃体标本35例为实验组，TH患者扁桃体标本23例为对照组。用HE染色法观察两组扁桃体组织的病理改变，用免疫组化实验检测IL-4、TNF-α、Foxp3在两组扁桃体组织中的表达差异与分布特征，用免疫荧光技术检测 CTLA-4在两组扁桃体组织中的表达差异和分布特征，用实时荧光定量PCR实验检测IL-4 mRNA、TNF-αmRNA、Foxp3 mRNA及CTLA-4 mRNA在两组扁桃体的相对表达定量。
　　结果：1）HE染色结果显示CT组扁桃体病理结构以滤泡增生和生发中心的变化为主要特征，TH组发现滤泡增生伴随明显的“星空”现象。2）免疫组化实验结果发现，相对于TH组而言，CT组的IL-4、TNF-α、Foxp3的表达均显著上调。3）免疫荧光结果显示 CT组扁桃体组织中 CTLA-4的平均荧光强度和密度均明显高于TH组。4）实时荧光定量PCR实验结果显示CT组IL-4mRNA, TNF-αmRNA, Foxp3 mRNA和CTLA-4 mRNA的相对表达量显著高于HT组（n=58，t=6.294，t=6.294，P值分别为P<0.01，P<0.05，P<0.0,5，P<0.01），差异有统计学意义。
　　结论：IL-4、TNF-α、Foxp3及CTLA-4在CT疾病的免疫应答过程中发挥重要的免疫促进或免疫抑制作用，影响CT炎症反应的发生发展。

目录

声明

中英文缩略词表

1前言

2材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1扁桃体组织的筛选

2.1.2扁桃体标本的收集

2.1.3主要试剂

2,1.4 主要溶液的配制

2.1.5主要仪器和设备

3 实验方法

3.1扁桃体组织预处理

3.2实时荧光定量PCR（qRT-PCR）

3.2.1 组织总RNA的提取

3.2.2 RNA浓度的测定

3.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性

3.2.4 将RNA逆转录成cDNA

3.2.5实时荧光定量PCR

3.3.2免疫组化实验

3.3.3免疫荧光实验

3.3.4 HE染色实验

3.4 蛋白免疫印迹实验（Western blot）

3.4.1 组织总蛋白的提取

3.4.2 BCA法蛋白定量

3.4.3 SDS-PAGE

3.4.4 蛋白转膜

3.4.5 封闭（blocking）

3.4.6 抗体孵育

3.4.7 底物显色反应

4.结果

4.1 HE染色结果图

4.2 IL-4、TNF-α、Foxp3、CTLA-4在两组扁桃体组织中的表达

4.3 IL-4、TNF-α、Foxp3、CTLA-4 mRNA在两组扁桃体组织中的表达

5讨论

6结论

参考文献

附录

致谢

综述:人扁桃体免疫学研究进展