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缩略词表
摘要
Abstract
前言
第一部分 寨卡病毒microRNA靶向减毒疫苗株的构建与鉴定
1 引言
2 材料
2.1 病毒毒株、菌株、细胞系、质粒以及实验动物
2.2 实验试剂和仪器
3.方法
3.1 ZIKV重组病毒全长感染性克隆构建策略
3.2构建方法
3.3 恢复病毒的传代和扩大培养
3.4 恢复病毒基因组的RT-PCR鉴定
3.5 恢复病毒的噬斑形成实验
3.6 恢复病毒的间接免疫荧光荧光实验
3.7 重组病毒基因组二级结构预测
3.8 重组病毒稳定性研究
3.9 重组病毒在乳鼠颅内神经毒力评价
4 结果
4.1 PCR 扩增各分片段
4.2 融合PCR方法扩增各目的片段
4.3 双酶切质粒及融合片段
4.4 重组克隆质粒线性化及酚氯仿抽提产物鉴定结果
4.5 体外转录重组病毒克隆质粒的产物鉴定
4.6 寨卡重组病毒基因组的RT-PCR鉴定
4.7寨卡重组病毒的空斑形态
4.8寨卡重组病毒的间接免疫荧光分析
4.9寨卡重组病毒基因组二级结构预测
4.10寨卡重组病毒体外稳定性研究
4.11寨卡重组病毒与亲本株的神经毒力评价
5 讨论
第二部分 寨卡病毒microRNA靶向减毒疫苗株的免疫原性与保护评价
1引言
2材料
2.1 毒株和实验动物
2.2 试剂与仪器
3方法
3.1 重组病毒在不同细胞系中的生长特征鉴定
3.2 转染miRNA mimics 后对重组病毒的影响
3.3 动物免疫
3.4 重组病毒在乳鼠颅内的复制情况
3.5 重组病毒在小鼠脏器的分布情况
3.6 重组病毒免疫中和抗体表达测定
3.7 重组病毒免疫孕保护效果评价
4结果
4.1 重组病毒和亲本株在不同细胞系中的生长特征测定
4.2 转染miRNA mimics 后对重组病毒复制的影响
4.3 重组病毒在BALB/c乳鼠颅内的复制情况评价
4.4 重组病毒在A129成鼠脏器的分布情况
4.5 重组病毒免疫BALB/c成鼠中和抗体表达情况
4.6 重组病毒成鼠体内免疫保护效果评价
4.7 重组病毒免疫孕鼠的保护效果评价
5讨论
总结
参考文献
附录 A 个人简历
附录 B 主要试剂、溶液配制
附录 C 硕士期间参与撰写的论著
致谢
综述
MicroRNA靶向性调控策略在减毒活疫苗中的研究进展
