负压创面治疗减轻烧伤创面铜绿假单胞菌感染的实验研究

摘要

研究背景：　　烧伤创面感染是严重烧伤患者后期形成创面脓毒症的主要原因，是导致烧伤患者后期死亡的重要原因。铜绿假单胞菌是最常见的烧伤创面感染菌之一，在烧伤创面感染后继续繁殖和扩增，可以导致严重烧伤患者并发脓毒症，大大增加了死亡率。近年来，烧伤ICU中铜绿假单胞菌的检出率和多重耐药率逐年增加,给抗生素治疗带来了极大地挑战。因此，创面局部抗感染治疗目前多采用抗感染敷料或负压封闭治疗。种类繁多的抗感染敷料，各有利弊及适应症。　　大量文献报道，NPWT能减轻局部组织水肿，增加创周血液流量，清除创面细菌，促进肉芽组织形成及加速创面愈合。因此NPWT也被广泛用于各种复杂创面处理。但对于烧伤创面感染后早期使用NPWT的治疗效果及可能存在的生物学效应仍有待进一步研究。为此，我们首先验证NPWT对感染创面细菌的清除作用，并观察创缘炎性细胞浸润情况，同时检验了本实验中使用的细菌荧光素酶标记的铜绿假单胞菌表达荧光的稳定性。在此基础上，我们建立了铜绿假单胞菌感染烧伤创面的小鼠模型，观察NPWT作用下细菌的扩散、小鼠死亡率、血清炎性因子水平变化和主要脏器损伤情况，探讨在烧伤感染早期创面使用NPWT相关生物学效应及其意义。　　方法：　　1.雄性C57小鼠40只，随机分为治疗组和对照组。建立全层皮肤缺损感染模型，感染后24小时，对治疗组行NPWT治疗，对照组常规凡士林油纱换药。治疗24小时后，观察创面标记菌荧光表达量；创面细菌培养并计数；HE染色观察创缘皮肤组织炎性细胞浸润。　　2.雄性C57小鼠50只，随机分为烫伤感染组和假烫感染组。烫伤感染组造成动物背部Ⅲ度烫伤后，将铜绿假单胞菌菌液注射于烫伤焦痂下，造成创面感染。假烫感染组常温雾化水蒸汽接触背部皮肤后，将铜绿假单胞菌菌液注射于假烫皮下。以实验第7天为实验结束时间。实时动态观察标记菌在创面增殖和扩散；统计7天死亡率；感染24小时后，检测脾脏中铜绿假单胞菌的阳性率。　　3.雄性C57小鼠90只，随机分为治疗组和对照组，实验开始前24小时建立烧伤创面感染模型，实验当天去除焦痂，治疗组行NPWT，对照组常规凡士林油纱换药。以实验第7天为实验结束时间。期间观察创面标记菌繁殖和扩散情况、7天死亡率、炎性因子水平、HE染色观察主要脏器损伤情况。　　结果：　　1.创面感染早期使用NPWT可显著降低创面细菌含量（P＜0.01），创缘组织中炎性因子浸润治疗组明显少于对照组（P＜0.05）。　　2.烫伤组中标记菌荧光表达量明显高于假烫组（P＜0.01），荧光表达范围也较假烫组大；7天累积死亡率烫伤组显著高于假烫组（P＜0.01，83.3％VS8.3％）；伤后24小时脾脏细菌培养烫伤组阳性率100％，检出菌均为铜绿假单胞菌。　　3.实验第三天，与对照组相比，NPWT可明显减少创面组织中标记菌含量（P＜0.01），降低血清促炎因子水平（P＜0.01）。相对于造模后未处理组，NPWT组7天动物累积死亡率明显降低（P＜0.01），但与对照组相比死亡率无显著差异。主要脏器组织切片观察NPWT组脏器损伤较轻。　　结论：　　1.实验表明，感染创面早期使用NPWT，能有效降低创面细菌含量，减轻创周组织炎性细胞浸润，降低创缘炎性反应。　　2.本实验使用荧光标记的铜绿假单胞菌建立了小鼠创面脓毒症模型，易于实验观察，可重复性好。该模型也可以用于相关课题的实验研究。　　3.本实验研究表明，NPWT用于铜绿假单胞菌感染的烧伤创面可以快速降低创面细菌含量，减轻全身炎性反应水平，减轻脏器损伤，降低烧伤创面脓毒症死亡率。

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封面

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缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

一、负压创面治疗技术在创面愈合中的应用及研究进展

二、负压创面治疗在临床中的应用新进展

正文

实验一 负压创面治疗减轻创面铜绿假单胞菌感染的实验观察

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二 铜绿假单胞菌感染烧伤创面脓毒症小鼠模型的建立

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验三 负压创面治疗对烧伤创面脓毒症小鼠死亡率的影响

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢