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英文缩略词表
Abstract
1 前言
2 材料与方法
2.1 实验器材
2.2 实验试剂
2.3 动物实验处理
2.4 睾丸组织形态学观察
2.5 TdT介导dUTP缺口末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡
（1）二甲苯中分两次脱蜡共计16分钟，无水乙醇5分钟，90%乙醇3分钟，70%乙醇3分钟，纯水或PB
（2）滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，37℃室温作用15-30分钟(根据组织厚度确定最佳
（3）待测样品用PBS洗净后，放入3%过氧化氢溶液(3% H2O2 和PBS)中室温孵育20-30分
（4）配制生物素标记液：
1个样品（μl）
5个样品（μl）
10个样品（μl）
TdT酶
50
250
500
（6）Streptavidin-HRP工作液和DAB显色液的配制：根据组织的大小和样品数配制适量的S
1个样品（μl）
5个样品（μl）
10个样品（μl）
5
10
Streptavidin-HRP稀释液
49
245
490
Streptavidin-HRP工作液
50
250
500
（7）样品的显色：在待测样品上滴加适量Streptavidin-HRP工作液，放入湿盒孵育30-40
染色后凋亡细胞核被染成深褐色或棕褐色。在光学显微镜下，以400倍视野观察细胞凋亡情况并拍照，并用图像
2.6 TM4细胞培养
2.7 CCK8（Cell Counting Kit-8）检测TM4细胞存活率
2.8 Annexin V-FITC染色FCM检测细胞凋亡
2.9 JC-1染色检测线粒体膜电位改变
2.10 Fluo-4染色检细胞内钙离子浓度改变
2.11 免疫蛋白印迹检测蛋白表达
2.11.1睾丸组织和TM4细胞蛋白提取
2.10.2蛋白含量测定
2.11.3 灌胶、上样、电泳、转膜、封闭、显影
2.12统计学处理
2.13实验流程图
3结果
3.1 MC-LR暴露未导致ICR雄性小鼠脏器系数改变
3.2小鼠睾丸组织病理学观察结果
3.3小鼠睾丸生殖细胞的凋亡情况
3.4小鼠睾丸组织Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的情况
3.5 小鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白表达的情况
3.6 MC-LR暴露与Bapta预处理对TM4细胞生存率的改变
3.7 MC-LR暴露对TM4细胞凋亡的影响
3.8 MC-LR暴露对TM4细胞线粒体膜电位的影响
图9.荧光显微镜检测MC-LR暴露对TM4细胞线粒体膜电位的影响（x400）
Figure 5.The effect of MC-LR exposure on mitochond
3.9 MC-LR暴露对TM4细胞内钙离子浓度的影响
3.10 MC-LR暴露上调TM4细胞中内质网应激相关蛋白表达且Bapta抑制MC-LR上调TM4细
3.11 MC-LR暴露上调TM4细胞中p-p38、p-Erk1/2、Erk1/2和p-CaMKⅡ表
3.12 MC-LR暴露上调TM4细胞中线粒体相关蛋白表达且Bapta抑制MC-LR上调TM4细胞线
6 参考文献
