小麦抗白粉病基因Pm35的抗病机理解析

目录

声明

符号说明

1 前言

1.1小麦白粉病抗性研究进展

1.1.1小麦白粉病病症

1.1.2小麦白粉病致病机理

1.1.3抗白粉病基因研究进展

1.2 NB-LRR类蛋白研究进展

1.2.1 TIR/CC结构域结构及功能

1.2.2 NBS结构域结构及功能

1.2.3 LRR结构域结构及功能

1.3 WRKY转录因子研究进展

1.3.1 WRKY转录因子的功能

1.3.2 NB-LRR蛋白结构域与WRKY转录因子互作机制

1.4 ExoCET技术

1.4.1 ExoCET技术简介

1.4.2 ExoCET技术原理

1.4.3 ExoCET技术优缺点

1.5研究背景与目的意义

1.5.1 Pm35的精细定位与候选基因的功能验证

1.5.2目的与意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1植物材料

2.1.2菌株

2.1.3质粒载体

2.1.4常用酶与化学试剂

2.2常用培养基及试剂配制

2.2.1常用培养基

2.2.2常用试剂配制

2.3主要试验方法

2.3.1植物培养及白粉菌接种方法

2.3.2常规分子实验

2.3.3载体构建

2.3.4 RNA相关实验

2.3.5 ExoCET直接克隆

2.3.6本生烟的注射实验

2.3.7考马斯亮蓝染色实验

2.3.8 BSMV-VIGS接种实验

2.3.9酵母双杂交相关实验

2.3.10双分子荧光互补实验

2.3.11 Luciferase实验

3结果与分析

3.1 Pm35所在区间物理图谱的确定

3.2 Pm35在六倍体小麦中的表型分析

3.2.1 Pm35在六倍体小麦中的表型鉴定

3.2.2 Pm35在人工合成小麦中的表型鉴定

3.3酵母cDNA文库的筛选

3.3.1诱饵基因毒性和自激活检测

3.3.2互作蛋白的筛选

3.4 WRKY的功能验证

3.4.1 WRKY的表达模式

3.4.2 BSMV-VIGS验证WRKY的功能

3.4.3 WRKY在烟草中的亚细胞定位

3.5互作蛋白的筛选验证

3.5.1双分子荧光互补实验鉴定Pm35互作蛋白

3.5.2 Luciferase实验鉴定Pm35互作蛋白

3.6 Pm35与WRKY的互作模式分析

3.6.1 Pm35与WRKY的特异性互作

3.6.2 Pm35与WRKY的互作结构域分析

4讨论

4.1 GemCode和ExoCET技术在小麦抗白粉病基因Pm35图位克隆上的应用

4.2 Pm35在六倍体小麦中的成株期抗性

5结论

参考文献

致谢