两种水貂肠炎细小病毒的分子生物学特征比较研究

目录

声明

符 号 说 明

前 言

1综述

1.1食肉动物细小病毒

1.2 水貂肠炎细小病毒的病原学特性

1.2.1水貂肠炎细小病毒的形态特点和理化性质

1.2.2水貂肠炎细小病毒的结构

1.2.3水貂肠炎细小病毒编码蛋白及功能

1.2.4水貂肠炎细小病毒的复制机制

1.3 水貂肠炎细小病毒的流行病学特征

1.3.1水貂肠炎细小病毒的致病机理

1.3.2水貂肠炎细小病毒的感染和传播特性

1.3.3水貂肠炎细小病毒的临床症状

1.4 水貂肠炎细小病毒的流行病学

1.4.2水貂肠炎细小病毒感染的宿主特异性

1.5水貂肠炎细小病毒的预防与诊断

1.5.1水貂肠炎细小病毒的预防

1.5.2水貂肠炎细小病毒的诊断

1.6本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1病毒来源

2.1.2 细胞、菌株和载体

2.1.3实验动物

2.1.4 引物

2.1.5实验耗材与试剂

2.1.6实验仪器

2.2 方法

2.2.1主要试剂的配制

2.2.2 CRFK细胞的复苏及冻存

2.2.3 CRFK细胞的培养和传代

2.2.4 MEV 的培养与增殖

2.2.5 MEV感染力测定

2.2.6 多步生长曲线

2.2.7 间接免疫荧光

2.2.8 细胞凋亡检测

2.2.9细胞周期检测

2.2.10血凝试验

2.2.11血凝抑制试验

2.2.12细胞活性检测

2.2.13实时荧光定量PCR

2.2.14 小鼠抗MEV单因子血清制备

2.2.15 MEV-SD1和MEV-SD7感染性克隆的构建

2.2.16 pM-MEV-SD1和pM-MEV-SD7重组质粒转染CRFK细胞及病毒拯救

2.2.17 MEV-SD1、MEV-SD7 VP2 300 位氨基酸定点突变病毒的拯救

3 结果

3.1 MEV-SD1和MEV-SD7 的分子生物学特征比较

3.1.1 MEV-SD1、MEV-SD7对CRFK细胞感染效率的比较

3.1.2 MEV-SD1、MEV-SD7在CRFK细胞中复制能力的比较

3.1.3 MEV-SD1、MEV-SD7诱导细胞凋亡的比较

3.1.4 MEV-SD1、MEV-SD7对细胞周期阻滞作用的比较

3.1.5 MEV-SD1、MEV-SD7交叉中和试验

3.2 MEV-SD1和MEV-SD7 感染性克隆的构建及全基因组序列分析

3.2.1 pM-MEV-SD1和pM-MEV-SD7重组质粒的构建及病毒拯救

3.2.2 MEV-SD1和MEV-SD7全基因组序列分析

3.3 VP2蛋白A300V对水貂肠炎细小病毒分子生物学特性的影响

3.3.1 MEV-SD1、MEV-SD7 VP2 300 位氨基酸定点突变病毒的拯救

3.3.2 VP2A300V对病毒感染效率的影响

3.3.3 VP2A300V突变病毒对细胞活性的影响

3.3.4 VP2A300V对突变病毒增殖规律的影响

3.3.5 VP2A300V突变病毒对感染细胞上清液中病毒滴度的影响

3.3.6 VP2A300V突变病毒诱导细胞凋亡的比较

3.3.7 VP2A300V突变病毒对细胞周期阻滞作用的比较

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况