表达1型鸭甲肝病毒VP1蛋白重组乳酸乳球菌株的构建及免疫效果评价

目录

声明

符号说明

1 前言

1.1鸭病毒性肝炎概述

1.2DHAV病原学特性

1.2.1DHAV形态学特点

1.2.2DHAV理化特性

1.2.3DHAV培养特性

1.2.4DHAV分子生物学研究

1.3流行病学

1.3.1鸭病毒性肝炎的发生与分布

1.3.2鸭病毒性肝炎的流行特点

1.4临床症状与病理变化

1.5鸭病毒性肝炎诊断与防治

1.5.1鸭病毒性肝炎诊断技术

1.5.2鸭病毒性肝炎的疫苗研究

1.6乳酸菌概述

1.6.1乳酸菌的益生作用

1.6.2乳酸菌活载体疫苗的优势

1.7乳酸菌表达外源蛋白的研究

1.7.1乳酸菌胞内分泌表达

1.7.2乳酸菌胞外分泌表达

1.7.3乳酸菌表面展示

1.8口服乳酸菌载体疫苗的黏膜免疫

1.9本研究目的及意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1质粒与菌株

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器

2.1.4主要试剂配制

2.1.5培养基配制

2.1.6乳酸菌感受态试剂配制

2.1.7 SDS-PAGE及Western Blot 试剂配制

2.2 表达DHAV-1VP1蛋白重组乳酸乳球菌的构建

2.2.1菌种鉴定

2.2.2构建克隆引物设计

2.2.3 PCR扩增

2.2.4PCR产物的纯化

2.2.5连接转化

2.2.6筛选阳性克隆

2.2.7质粒提取

2.2.8酶切鉴定

2.2.9乳酸菌MG1363感受态制备

2.2.10 高压脉冲电击转化

2.2.11 重组乳酸菌革兰氏染色

2.3 DHAV-1 VP1重组乳酸乳球菌表达验证

2.3.1重组菌间接免疫荧光鉴定

2.3.2VP1蛋白提取方法

2.3.3VP1蛋白表达的Western blot检测

2.4动物攻毒保护试验及细胞因子检测

2.4.1设计方案

2.4.2血清中IgG和肠黏膜SIgA抗体检测

2.4.3血清中细胞因子水平测定

2.4.4数据分析

3结果与分析

3.1菌株鉴定结果

3.2 PCR扩增结果

3.3质粒酶切鉴定

3.4乳酸菌电转化结果

3.5重组乳酸菌革兰氏染色结果

3.6重组乳酸菌间接免疫荧光

3.7 Western Blot检测分析

3.8 IgG和SIgA抗体水平检测结果

3.9血清中细胞因子检测结果

3.10 攻毒保护率监测

4讨论

5 结论

参考文献

致谢

8附录