hsa-miR-1301-3p抑制ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1基因表达进而影响酒精代谢的机制研究

目录

引言

实验材料和方法

1 主要实验仪器

2 主要实验试剂

3 常用溶液的配制

4 生物信息学分析

5 细胞培养，转染和乙醇处理

5.1 细胞传代

5.2 细胞冻存

5.3 细胞复苏

5.4 细胞转染（以转染12孔板为例）

5.5 乙醇处理

6 荧光RNA迁移率变动实验技术-FREMSA

6.1 FREMSA胶的配制

6.2 FREMSA结合反应体系

6.3 电泳分析

7 双荧光素酶报告基因实验

7.1 报告基因质粒的构建

7.2 提取质粒

7.3 报告基因检测

8 实时定量PCR实验

8.1 总RNA的提取

8.2 逆转录为cDNA

8.3 荧光实时定量PCR（qRT-PCR）

8.4 RT-PCR反应体系

8.5 RT-PCR反应条件设置

8.6 qRT-PCR结果计算

9 Western blotting实验

9.1 总蛋白提取

9.2 BCA法测定蛋白浓度

9.3 蛋白上样电泳

10 统计分析

结果

1 筛选靶向ADH和ALDH基因的miRNA

2 hsa-miR-1301-3p可体外结合ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1基因 3' UTR内结合位点

3 hsa-miR-1301-3p可以抑制ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1 基因3' UTR产生的荧光素酶活性

4 hsa-miR-1301-3p可以抑制肝细胞内源性ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1的表达

5 hsa-miR-1301-3p抑制了肝细胞内乙醇诱导的ADH6、ALDH5A1和ALDH8A1的表达

讨论

结论

参考文献

综述:microRNA在酒精性肝病中的调控作用机制研究进展

综述参考文献

攻读学位期间的研究成果

附录（中英文缩略词）

致谢

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