骨髓间充质干细胞移植治疗慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的疗效观察

摘要

目的：探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）对慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）模型大鼠的治疗效果，为COPD的临床治疗提供更为有效的新思路。　　方法：选取10只健康清洁SD大鼠，利用全骨髓贴壁细胞法传代培养BMSCs，并通过特异性表面标记物进行鉴定。另选择健康无特定病原体（Specific Pathogen Free,SPF）级SD（Sprague Dawley）大鼠80只，雌雄各半，采用熏烟法诱导制备COPD大鼠模型，70d后，通过临床症状、血清炎性因子表达水平及病理形态学变化判断模型。将成功制备的COPD大鼠模型随机分为模型空白组（A组）、多索茶碱组（B组）、BMSCs高剂量组（C组）及BMSCs低剂量组（D组），再随机选取10只健康大鼠作为正常对照组（E组），共5组，每组均含10只大鼠（n=10）。分组后对各组大鼠进行相应处理，B组大鼠灌胃多索茶碱液，以1.64mg/ml/只为单位治疗，每日一次；C组及D组分别移植1×107/ml及1×106/ml BMSCs，20天移植1次，共2次；A组及E组大鼠未作特殊处理，正常饲养。40d后，检测各组大鼠外周血白细胞总数，使用ELISA法检测血清中白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）及粒细胞集落刺激因子（Granulocyte-Colony Stimulating Factor，G-CSF）表达水平，同期处死后观察各组大鼠肺组织病理变化，并进行肺组织细胞因子的免疫荧光检测。　　结果：　　1.外周血中白细胞总数检测：A、B、C、D四组COPD模型大鼠外周血中白细胞总数均高于E组（P＜0.05）；其中A、B、C、D四组模型大鼠外周血中白细胞总数比较：A、B两组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；C、D两组均明显低于 A组（P＜0.05），且C组低于D组（P＜0.05）。　　2.血清中IL-10及G-CSF表达水平检测：　　（1）IL-10检测：A、B、C、D四组COPD模型大鼠与E组比较，血清中IL-10表达水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），四组模型大鼠中，C组高于D组，D组高于B组，B组表达水平较A组升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　（2）G-CSF检测：A、B、C、D四组COPD模型大鼠血清中G-CSF表达水平均高于E组，差异有统计学意义（P＜0.05），四组模型大鼠中，A组大鼠血清中G-CSF表达水平高于B组，B组高于D组，D高于C，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　3.肺组织病理形态学观察：E组大鼠肺组织肉眼下呈粉红色；镜下可见，肺组织呈现正常生理结构，未见明显炎性细胞浸润。COPD模型组大鼠肺组织肉眼观略显苍白，镜下见，肺部基本结构破坏，肺泡壁破裂，肺泡间互相融合形成肺大泡，并可见明显炎性细胞浸润。治疗后，肺组织病理形态改善，较好的恢复肺泡基本结构，仅见少量炎性细胞浸润，炎症消散，气道粘膜下腺体增生减轻或消失，杯状细胞增生以及粘膜上皮局灶性增生减轻或消失。各实验组大鼠比较，B组、C组、D组大鼠肺组织病理形态较A组大鼠改善，其中C组大鼠较D组明显改善，D组较B组明显改善。　　4.组织免疫荧光检测显示：各实验组大鼠进行比较，肺组织中G-CSF、IL-10的表达具有显著差异，与血清中ELISA检测结果一致。　　结论：经过BMSCs移植后的COPD模型大鼠外周血中白细胞总数及血清中G-CSF表达水平明显降低，血清中IL-10表达水平明显升高，且损伤部位病理形态明显改善，说明BMSCs对COPD模型大鼠具有显著的治疗效果。

目录

声明

前言

1 材料及方法

1.1 实验动物

1.2 药品及试剂

1.3主要试剂的配制

1.4仪器设备

1.5实验方法

2.结果

2.1.BMSCs特异性表面标记物的鉴定

2.2 COPD模型的鉴定

2.3 各组治疗后外周血中白细胞检测

2.4各组治疗后血清中IL-10 及G-CSF表达水平检测

2.5 各组治疗后肺组织病理形态学观察

2.6 各组治疗后肺组织免疫荧光检测

3 讨论

4 结论

参考文献

文献综述:间充质干细胞移植治疗慢性阻塞性肺疾病研究进展

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢