选择性COX-2抑制剂联合顺铂对肺癌细胞凋亡的作用及其机制研究

摘要

目的：探讨选择性COX-2抑制剂尼美舒利（NIM）联合顺铂（DDP）对肺癌细胞凋亡的作用及其机制。　　方法：1.构建肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型2.按照随机数字表法将肺腺癌A549细胞荷瘤裸鼠分为对照组、NIM组、DDP组和NIM+DDP组4组：其中对照组样本实施腹腔注射0.9%的生理盐水，胃灌注0.5%羟甲基纤维素钠（CMC）；NIM组样本实施胃灌注NIM溶液，持续21天；DDP组样本腹腔注射DDP溶液，每4天腹腔注射一次，共5次；NIM+DDP组样本实施腹腔注射DDP溶液，每4天腹腔注射一次，共5次，同时持续胃灌注NIM溶液21天。给药期间每4天进行一次荷瘤裸鼠的瘤径的测量，并绘制肿瘤生长曲线，观察裸鼠的精神、饮食及体重等各项指标的变化情况。3.计算抑瘤率：第21天将荷瘤裸鼠处死，剥离裸鼠瘤体，测量各组瘤体的重量、体积，计算抑瘤率。4.用原位末端标记（tunel）荧光法检测NIM联合DDP对肺腺癌细胞凋亡的影响。5.用免疫组化法测各组肺腺癌A549裸鼠移植瘤细胞中细胞增殖因子PCNA，细胞周期因子Cyclin D1、CDK4，细胞凋亡因子BCL-2、P53等蛋白的表达，探讨NIM联合DDP抑制肺癌细胞凋亡的机制。　　结果：1.成功建立肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型。2.NIM组、DDP组、NIM+DDP组的瘤体体积抑瘤率分别为19.13%、40.15%和59.96%。NIM组、DDP组、NIM+DDP组的瘤重抑瘤率分别为20.00%、37.34%和55.88%。NIM+DDP组的抑瘤率明显大于NIM组、DDP组的抑瘤率，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM单独用药不仅有抑制肺癌生长的作用，与DDP联合用药后抑制肺癌的作用更显著。3.tunel法检测结果：NIM组凋亡指数高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）;NIM+DDP组凋亡指数高于对照组、NIM组与DDP组，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM具有诱导肺癌细胞凋亡的作用，与DDP联合用药后诱导肺癌细胞凋亡作用更显著。4.免疫组化结果：PCNA、Cyclin D1、CDK4、BCL-2、P53在肺腺癌A549裸鼠移植瘤细胞内呈阳性表达。NIM组中PCNA、Cyclin D1、CDK4、BCL-2、P53的阳性表达分别与其在对照组中的阳性表达相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM+DDP组中PCNA的阳性表达，显著低于其在对照组、NIM组及DDP组中的阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM+DDP组中Cyclin D1的阳性表达，显著低于其在对照组、NIM组及DDP组中的阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM+DDP组中CDK4的阳性表达，显著低于其在对照组、NIM组及DDP组中的阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM+DDP组中BCL-2的阳性表达，显著低于其在对照组、NIM组及DDP组中的阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。NIM+DDP组中P53的阳性表达，显著低于其在对照组、NIM组及DDP组中的阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：1.选择性COX-2抑制剂NIM有抑制肺腺癌生长的作用,当与DDP联合后其抑制作用更明显。2.选择性COX-2抑制剂NIM有诱导肺癌细胞凋亡的作用，与DDP联合使用其诱导作用更为显著。3.选择性COX-2抑制剂NIM与DDP联合用药抑制肺腺癌生长、诱导细胞凋亡的机制可能与下调细胞增殖因子PCNA、细胞周期因子Cyclin D1、CDK4细胞凋亡因子BCL-2、P53等蛋白有关。4.选择性COX-2抑制剂NIM联合DDP可能会成为治疗肺癌新的辅助因子。

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