探索研究在恶性胸膜间皮瘤中EZH2与Hedgehog通路的相关性

摘要

研究背景：恶性胸膜间皮瘤（malignant pleural mesothelioma，MPM）是一种高侵袭性肿瘤，临床上缺少有效治疗手段，预后较差。目前，恶性胸膜间皮瘤的发病机制并未得到完全阐明，探索MPM相关分子通路的变化，不仅有助于揭示MPM的分子机制，而且将为治疗提供新的靶点和途径。已有研究表明Cul4A蛋白通过Hegdehog通路中Gli1蛋白调节恶性胸膜间皮瘤发生发展。EZH2与非小细胞肺癌（NSCLC）肿瘤细胞的生长及预后具有相关性，前期研究通过染色质免疫共沉淀-启动子芯片技术(CHIP-on-chip)检测 EZH2在不同类型非小细胞肺癌细胞株中的结合调控基因结果提示：在不同类型非小细胞肺癌细胞中EZH2与Cul4A基因启动子均有结合，Cul4A可能是EZH2调控的靶基因，我们推测在恶性胸膜间皮瘤中可能存在EZH2－Cul4A－Gli1调控通路通路，参与恶性胸膜间皮瘤的发生发展。　　目的：检测恶性间皮瘤细胞H2452、MSTO-211H以及人正常间皮细胞株Met-5A中EZH2、Cul4A、Gli1基因的表达情况和恶性间皮瘤患者病理组织中EZH2、Cul4A、Gli1蛋白的表达并明确其相关性。　　方法：　　1.Real-time PCR检测恶性间皮瘤细胞株H2452、MSTO-211H以及人正常间皮细胞株Met-5A中EZH2、Cul4A、Gli1mRNA的表达量；　　2.利用siRNA下调EZH2基因后检测Cul4A、Gli1mRNA的表达变化；　　3.导入外源 EZH2基因后检测Cul4A、Gli1mRNA的表达变化；　　4.利用免疫组化技术检测在石蜡包埋间皮瘤组织中EZH2、Cul4A、Gli1表达及分析其相关性。　　结果：　　1.根据Real-time PCR的结果发现:EZH2高表达的H2452细胞中，Gli1呈高表达， Cul4A表达量无明显差异；EZH2低表达的MSTO-211H细胞中，GLI1呈低表达，Cul4A呈高表达。　　2.根据Real-time PCR的结果发现：在EZH2高表达的H2452细胞中，敲除EZH2基因48小时后，Gli1表达量下降，Cul4A表达量无明显差异。　　3.根据Real-time PCR的结果发现：在EZH2低表达的MSTO-211H细胞中，导入外源性EZH2基因48小时后，Gli1表达量升高，Cul4A表达量无明显差异。　　4.免疫组织化学染色结果提示：在恶性胸膜间皮瘤组织中EZH2与Gli1表达存在正相关（rs=0.815，P<0.05）　　5.免疫组织化学染色结果提示：在恶性胸膜间皮瘤组织中EZH2与Cul4A表达无相关性（rs=0.145，P>0.05）。　　6.免疫组织化学染色结果提示：在恶性胸膜间皮瘤组织中Cul4A与Gli1表达呈正相关（rs=0.577，P<0.05）。　　结论：　　1.在EZH2高表达的H2452细胞中，Gli1同时有高表达，敲除EZH2基因后Gli1表达随之下降。在EZH2低表达的MSTO-211H中，Gli1同时有低表达，在导入EZH2基因后， Gli1表达随之升高；EZH2与Cul4A表达差异无明显相关性。提示Gli1可能受到EZH2的调控，EZH2可能参与调控Hegdehog信号传导通路。　　2.免疫组织化学染色检测在恶性胸膜间皮瘤组织中，EZH2与Gli1表达呈正相关， Cul4A与Gli1的呈正相关, EZH2和Cul4A表达无明显相关性。提示Cul4A可能参与Hegdehog信号传导通路，但并未受EZH2直接调控。

目录

声明

前言

1. 实验材料

1.1 细胞株

1.2 主要实验试剂

2. 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 Real-time PCR检测MSTO-211H、H2452中EZH2、CUL4A、GLI1的表达差异

2.3 质粒扩增及提取

2.4 脂质体介导质粒转染H2452、MSTO-211H细胞

2.5 Real-time PCR检测转染后细胞中EZH2、CUL4A和GLI1的表达变化

2.6 免疫组化法检测恶性胸膜间皮瘤组织中EZH2、CUL4A和GLI1的表达

3. 结果

4.讨论

4.1恶性胸膜间皮瘤中的Hedgehog信号通路

4.2.Cul4A在MPM中的表达及其与Gli1的相关性

4.3 EZH2在MPM中的表达及其与Gli1的相关性

4.4 EZH2与Cul4A表达的相关性

5.结论

参考文献

文献综述:Hedgehog通路信号转导机制的研究进展

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

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致谢