耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染阳性患者肠道菌群的相关性研究

摘要

目的：本课题的研究目的是通过比较感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的患者与未感染该菌人群的肠道细菌结构，观察MRSA患者肠道菌群结构及数量的变化，以建立MRSA与肠道菌群变化的联系。　　方法：通过荧光定量、PCR技术，采用通用引物扩增样品中全部细菌16S rDNA基因。将扩增产物DNA进行提取并克隆测序，利用Real-time PCR定量分析MRSA患者金黄色葡萄球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌属和肠球菌属、肠杆菌属的变化。　　结果：1、Real-timePCR结果显示：MRSA患者组中肠道金黄色葡萄球菌数量较对照组增多(p<0.05)，MRSA患者组中双歧杆菌属和乳酸杆菌属数量明显减少(p<0.05)、肠球菌属和肠杆菌属的数量显著增加(p<0.05)，均有统计学意义。2、测序结果显示：MRSA患者组和对照组肠道内的菌群多样性和丰富度具有显著性差异，实验组肠道菌群的多样性以及丰富度明显低于对照组。　　结论：通过比较MRSA实验组与对照组人群的肠道菌群结构，发现MRSA患者肠道菌群结构及数量发生改变，说明肠道菌群改变与MRSA感染确实存在关联。

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1 材料与方法

1.1样本收集

1.2 主要试剂

1.3主要仪器设备见表1

2.实验方法

2.1 细菌总 DNA 的提取

2.2 PCR引物的设计

2.3 5种细菌属的特异性PCR扩增

2.4 5种细菌属16SrDNA实时荧光定量RT-PCR检测

2.5实验组、对照组粪便标本RT-PCR反应

2.6 16SrRNA V1-V3区序列扩增以及PCR产物的测序

3统计分析

4结果

4.1粪便DNA的浓度及纯度测定

5实时荧光定量RT-PCR标准曲线的建立

5.1 5 种细菌属的标准曲线

5.2 5 种细菌属的溶解曲线

6肠道微生物样本中细菌的结果与分析

6.1病例组及对照组粪便标本细菌荧光定量检测结果

6.2样品测序结果分析：

7 讨论

结论：

参考文献

附图：

缩略语表

文献综述:肠道菌群与人类疾病关系的研究进展

攻读学位期间发表文章情况

个人简历

致谢