β--榄香烯在三阴乳腺癌中对5FU增敏作用及分子机制研究

摘要

目的:三阴乳腺癌是指孕激素受体、雌激素受体、和人表皮生长因子受体2均无表达的乳腺癌。其治疗效果及预后都比较差。化疗是其主要的疗法之一。5-氟尿嘧啶普遍用于三阴乳腺癌的临床治疗过程中，但5-氟尿嘧啶在实际临床用药中效果仍差强人意。β-榄香烯是从中药莪术提取的具有抗肿瘤作用的活性单体，能够通过抑制PI3k/AKT，MAPK，NF-KB等通路发挥抗肿瘤作用。本研究观察β榄香烯是否增强抑制5FU介导的三阴乳腺癌细胞生长和增殖、迁移和侵袭能力、凋亡能力、成球能力以及抑制PI3K/AKT通路、MAPK通路、NF-KB通路。目的是探讨β-榄香烯是否可能协同5FU增强其化疗作用。　　方法:1.利用MTT实验测试只用不同浓度的5FU处理MDA-MB-231，BT549两种肿瘤细胞48小时以后的活力，以及10μm5FU联合50μmβ-榄香烯作用MDA-MB-231，BT549两种三阴乳腺癌细胞48小时后的细胞活力。　　2.利用克隆形成实验测试β-榄香烯联合5FU对MDA-MB-231和BT549这两类三阴乳腺癌细胞增殖能力的影响。观测β-榄香烯联合5FU对MDA-MB-231和BT549细胞的生长状况的影响。　　3.利用划痕实验、transwell基质胶侵袭实验测试β-榄香烯联合5FU对三阴乳腺癌细胞的迁移以及侵袭周边正常组织的能力的影响。主要EMT蛋白的表达情况可以通过Westernblot进行测试。　　4.利用成球实验测试β-榄香烯联合5FU对三阴乳腺癌细胞成球能力的影响。主要干性蛋白的表达情况可以通过Westernblot进行测试。　　5.利用AO/EB染色实验测试β-榄香烯联合5FU诱导三阴乳腺癌细胞凋亡的效果。通过Wesrernblot明确与MDA-MB-231和BT549这两类三阴乳腺癌细胞凋亡有关的部分蛋白的表达情况。借助激光共聚焦实验发现细胞色素C在线粒体外的外释情况。　　6.在β-榄香烯联5FU联合作用48小时后，通过Westernblot检测三阴乳腺癌细胞PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK通路主要蛋白的表达情况。MTT检测PI3K抑制剂LY294002、MEK抑制剂U0126预处理后与联合用药共同作用三阴乳腺癌细胞48小时后的细胞活力。　　7.在β-榄香烯与5FU共同作用于MDA-MB-231和BT549细胞48小时后，通过westernblot分别测试肿瘤细胞中与NF-κB通路有关的蛋白的表达情况。通过激光共聚焦显微镜确定p65、p50蛋白在MDA-MB-231和BT549细胞中的定位情况。　　结果:1.β-榄香烯可以促进5FU对三阴乳腺癌细胞活力和增殖能力的抑制。联合50μmβ-榄香烯使5FU的IC50值明显降低。　　2.β-榄香烯可以在很大程度上加强5FU抑制三阴乳腺癌细胞增殖的效果。5FU联合β-榄香烯能够使三阴乳腺癌细胞的生长状态出现明显的改变。　　3.β-榄香烯能够增强5FU对三阴乳腺癌细胞迁移、侵袭的抑制能力，并且能够使主要EMT相关蛋白表达量明显降低。　　4.β-榄香烯可以促进5FU对三阴乳腺癌细凋亡的诱导，使得三阴乳腺癌细胞的内源性线粒体凋亡途径被激活。　　5.β-榄香烯联合5FU可以增强抑制三阴乳腺癌细胞的成球能力，并且能够使主要干性相关蛋白表达量明显降低。　　6.β-榄香烯联合5FU使得三阴乳腺癌细胞PI3K/AKT、RAF-MEK-ERK和NF-κB信号通路受到显著抑制。　　结论:本研究实验结果提示β-榄香烯可以在体内通过PI3K/AKT，RAF-MEK-ERK和NF-κB信号通路促进化疗药物5FU对三阴乳腺癌的抑制作用。为β-榄香烯在三阴乳腺癌治疗的临床应用提供理论依据。

目录

声明

摘要

(一)前言

(二)材料和方法

1．材料

2．实验所用方法

3．统计学分析

(三)结果

(四)讨论

(五)结论

参考文献

综述

攻读学位期间发表论文情况

致谢