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黄根蒽醌类化学成分提取工艺的优化、分离鉴定及其抗肿瘤活性的初步研究

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摘要

黄根(Prismatomeris connata Y. Z. Ruan)是岭南地区的一种特色中药材,在肝炎、白血病、贫血症、矽肺等疾病的治疗中发挥重要的作用。本文的实验材料黄根采购于广西南宁,将其粉碎后,采用响应面法优化其游离总蒽醌的提取工艺;通过各种柱层析法对其乙酸乙酯部的化学成分进行分离和纯化;根据波谱数据分析鉴定了分离得到的化合物结构;并采用MTT法对化合物的细胞毒性进行了测定。
  本研究主要内容包括:⑴通过实验研究了提取次数、提取温度、提取时间、溶剂配比、料液比五个因素对提取工艺的影响,并在单因素试验基础上,选取了提取时间、溶剂配比、料液比,采用3因素、3水平的Box-Benhnken响应面分析法进行工艺优化,得到优化的提取工艺条件:提取时间为3.05h,溶剂配比为0.62:1,料液比1:18.83。在提取次数为2次,提取温度为60℃时,黄根游离总蒽醌的理论提取率最高,可达0.151%。经验证,此条件下黄根游离总蒽醌含量为0.152%,与理论值较为接近。⑵将黄根粉碎,用95%的乙醇浸提三次后将提取液浓缩成浸膏,用水溶解,再分别用石油醚和乙酸乙酯进行萃取。综合运用硅胶柱色谱、反相柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱等多种色谱法对其乙酸乙酯部进行研究,分离得到20个化合物。⑶通过对化合物的一维核磁谱(氢谱、碳谱)、二维核磁谱(HSQC、HMBC、1H-1H COSY、NOESY)、质谱和高分辨质谱进行解析,并参考相关文献,鉴定了所有分离到的化合物结构,结果表明其均属于蒽醌类化合物,分别为7-羟基-1,2-二甲氧基-6-甲基蒽醌(1)、1,3,8-三羟基-7-甲氧基-2-甲基蒽醌(2)、3-羟基-1-甲氧基-2-羟甲基蒽醌(3)、2-羟基-4,6,7-三甲氧基-3-甲基蒽醌(4)、3β,5-二羟基-6,7-二甲氧基-2α-甲基-1,2,3,4-四氢蒽醌(5)、3β-羟基-5,6-二甲氧基-2α-甲基-1,2,3,4-四氢蒽醌(6)、1,3-二羟基-5,6-二甲氧基-2-甲基蒽醌(7)、3-羟基-1-甲氧基-2-甲基蒽醌(8)、1,3-二羟基-2-甲基蒽醌(9)、1-羟基-3-甲氧基-2-羟甲基蒽醌(10)、1-甲氧基-2-甲基蒽醌(11)、2-羟基-1-甲氧基蒽醌(12)、2-甲氧基蒽醌(13)、2-甲基蒽醌(14)、1-羟基-2,3,4-三甲氧基-7-甲基蒽醌(15)、1,2,3-三甲氧基-7-甲基蒽醌(16)、1-羟基-2-甲氧基蒽醌(17)、2α-羟基-5,6,7-三甲氧基-3β-甲基-1,2,3,4-四氢蒽醌(18)、2α-羟基-6,7,8-三甲氧基-3β-甲基-1,2,3,4-四氢蒽醌(19)、2α-羟基-5,6,7,8-四甲氧基-3β-甲基-1,2,3,4-四氢蒽醌(20)。⑷选用肺癌细胞系H520,采用MTT法测定了分离得到的化合物体外细胞毒活性。结果显示:化合物7表现出明显的细胞毒活性,IC50达到6μM;化合物8和15具有比较弱的细胞毒活性,IC50均为20μM,其余化合物没有表现出细胞毒活性。

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