嗜根考克氏菌DC2201中双组分信号系统的研究

目录

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缩略语

1引言

1.1.1嗜根考克氏菌的发现

1.1.2嗜根考克氏菌的生物学特征

1.1.3嗜根考克氏菌的应用

1.2双组分信号系统简介

1.2.1组氨酸激酶

1.2.2应答调控蛋白

1.2.3双组分信号系统的分布

1.2.4双组分信号系统的的研究方法

1.3研究的目的和意义

1.4技术路线

2 嗜根考克氏菌双组分信号系统的生物信息学分析

2.1材料与方法

2.1.1基因组序列来源

2.1.2 HKs和RRs的鉴定及结构分析

2.1.3 HKs和RRs的功能预测

2.2.1嗜根考克氏菌的基因组信息

2.2.2嗜根考克氏菌中的TCS分布

2.2.3嗜根考克氏菌HKs和RRs的结构组成和分布

2.2.4嗜根考克氏菌TCSs的功能预测

2.3本章小结

3 HK8700和RR8701自磷酸化和磷酸转移的分析与鉴定

3.1材料

3.1.1实验菌株和质粒

3.1.2主要药品和试剂

3.1.3实验仪器和设备

3.1.4试剂及其配制

3.2.1嗜根考克氏菌DC2201全基因组DNA的提取

3.2.2目的基因的克隆

3.2.3 pGBT9-HK8700和pGAD10-RR8701重组质粒的构建

3.2.4 酵母双杂交技术筛选互作蛋白

3.3结果

3.3.1嗜根考克氏菌DC2201的总DNA

3.3.2目的基因hk8700和rr8701的扩增

3.3.3构建pGBT9-HK8700和pGAD10-RR8701重组质粒

3.3.4酵母双杂交筛选

3.4 本章小结

4 嗜根考克氏菌rr8701基因打靶载体的构建

4.1实验材料

4.1.1实验菌株和质粒

4.1.2主要药品和试剂

4.1.3实验仪器和设备

4.1.4试剂及其配制

4.2实验方法

4.2.1基因的克隆

4.2.2表达载体pET-29a(+)-HK8700*和pPGH-RR8701的构建

4.2.3 HK8700*和RR8701的表达

4.2.4 HK8700*和RR8701的SDS-PAGE

4.2.5 HK8700*和RR8701的纯化

4.2.6 MALDI-TOF-TOF鉴定重组蛋白

4.2.7磷酸化反应

4.3实验结果

4.3.1目的基因hk8700*和rr8701的扩增

4.3.2表达载体pET-29a(+)-HK8700*和pPGH-RR8701的构建

4.3.3 HK8700和RR8701的表达、纯化及鉴定

4.3.4磷酸化反应

4.4讨论

4.5本章小结

5 嗜根考克氏菌rr8701基因打靶载体的构建

5.1实验材料

5.1.1实验菌株和质粒

5.1.2主要药品和试剂

5.1.3实验仪器和设备

5.1.4试剂及其配制

5.2 实验方法

5.2.1嗜根考克氏菌的抗生素敏感性分析

5.2.2融合PCR法构建rr8701基因敲除盒

5.2.3构建rr8701敲除载体

5.3 结果与分析

5.3.1嗜根考克氏的抗生素敏感性分析

5.3.2敲除载体pKC1139-UCD的构建

5.4 讨论

5.5本章小结

6结论与展望

6.1结论

6.2下一步工作计划

参考文献

附录

致谢

在读期间公开发表论文（著）及科研情况

公开发表的论文

参与的科研项目