猪伪狂犬病毒gI和gE基因在其毒力增强中的作用及三基因缺失活疫苗的构建

目录

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摘要

第一章伪狂犬病毒分子生物学及疫苗研究进展

1病毒分子生物学

1．1病毒结构

1．2基因组及编码蛋白

1．3病毒复制周期

1．4流行病学

2免疫与疫苗

2．1灭活疫苗

2．2弱毒疫苗

2．3亚单位疫苗

2．4 DNA疫苗

参考文献

第二章猪伪狂犬病毒两个不同毒力毒株全基因组序列比较分析

1．1病毒与细胞

1．2酶与试剂

1．3 PRVLA病毒增殖、纯化与基因组DNA提取

1．4 Ion Torrent高通量测序

1．5序列的拼接与组装

1．6初测结果Gap填补

1．7 PRVLA序列验证

1．8 PRV LA基因注释、功能预测及特性分析

1．9进化树分析

1．10关键基因编码氨基酸序列比对分析

2结果

2．1 PRV LA株DNA提取与纯化

2．2 PRV LA基因组序列的测定

2．3 PRV LA基因组注释

2．4 PRV基因进化树分析

2．5 PRV LA与ZJ01编码氨基酸序列分析

2．6 PRV基因组非编码区比对

3讨论

参考文献

第三章猪伪狂犬病毒gI和gE基因在其毒力增强中的作用

1材料与方法

1．1病毒与细胞

1．2质粒与菌株

1．3酶与试剂

1．4 PRV rZJ-LA／EI、rLA-ZJ／EI gIgE基因交换株的构建

1．5重组病毒体外增殖特征测定

1．6重组病毒体内毒力试验

1．7猪体排毒检测

1．8组织器官中PRV病毒载量检测

1．9病理变化

1．10统计学分析

2结果

2．1重组病毒体外感染特性

2．2重组病毒猪体毒力测定

3讨论

参考文献

第四章猪伪狂犬病毒ZJ01 gI／gE／TK三基因缺失疫苗毒株构建与鉴定

1材料与方法

1．1病毒与细胞

1．2质粒与菌株

1．3酶与试剂

1．4病毒增殖、纯化与基因组提取

1．5引物设计及同源重组臂片段扩增

1．6转移载体的构建与验证

1．7重组病毒拯救与噬斑纯化

1．8病毒体外增殖特征测定

1．9统计学分析

2结果

2．1 中间载体构建与鉴定

2．2转移载体构建与鉴定

2．3 ZJ01-GFPΔgI／gE／TK重组病毒拯救与纯化

2．4 ZJ01ΔgI／gE／TK重组病毒拯救与纯化

2．5重组病毒空斑大小

2．6病毒生长曲线

2．7重组病毒体外增殖稳定性

3 讨论

参考文献

第五章猪伪狂犬病毒ZJ01毒株双基因及三基因缺失疫苗毒株安全性和免疫效力比较

1材料与方法

1．1病毒与细胞

1．2试剂

1．3疫苗的准备

1．4仔猪免疫安全性试验

1．5仔猪免疫保护力试验

1．6免疫及攻毒后排毒的检测

1．7 PRV gB ELISA抗体的检测

1．8血清PRV病毒中和抗体的检测

1．9组织器官中PRV病毒载量检测

1．10病理变化

1．11统计学分析

2结果

2．1 免疫后体温及临床病理变化

2．2免疫后排毒情况

2．3血清抗体水平

2．3 免疫后组织器官眼观病变及微观病变

2．4免疫后组织器官PRV病毒载量检测

2．5攻毒后体温及临床病理变化

2．6攻毒后猪排毒情况

2．7攻毒后组织器病理变化

2．8攻毒后组织器官PRV病毒载量检测

3讨论

参考文献

全文总结

文章创新点

致谢

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