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赭曲霉毒素A促进PCV2复制的自噬机制及硒与酵母多糖的调控作用研究

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摘要

符号与缩略语

前言

第一章猪圆环病毒2型研究概况

1.猪圆环病毒2型的生物学特性

2.猪圆环病毒2型的流行病学

2.1传染源

2.2易感动物

2.3传播途径

2.4流行病学分析

3.1 PCV2亚临床感染

3.2猪圆环病毒相关疾病

4.猪圆环病毒2型与细胞自噬

5.猪圆环病毒病的诊断

5.1病毒分离与鉴定

5.2聚合酶链式反应(PCR)技术

5.3间接免疫荧光技术(IFA)

5.4免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)

5.5原位杂交(ISH)

5.6酶联免疫吸附试验(ELISA)

6.猪圆环病毒病的防控

6.1猪群疫病监控

6.2加强饲养管理

6.3控制混合感染

6.4猪群营养

6.5繁殖与精液控制

6.6疫苗接种

参考文献

第二章赭曲霉毒素A研究概述

1.赭曲霉毒素A的简介

1.1赭曲霉毒素A的结构与理化性质

1.2赭曲霉毒素A来源

1.3赭曲霉毒素A的体内吸收与代谢

2.赭曲霉毒素A的污染分布情况

2.1粮食性产品

2.2动物性食品

2.3植物性食品及相关产品

3.赭曲霉毒素A的限量标准

4.赭曲霉毒素A的毒性

4.1急性毒性

4.2肾毒性

4.3肝毒性

4.4免疫毒性

4.5三致作用

5.赭曲霉毒素A的毒性作用机理

5.1诱导氧化应激

5.2诱导细胞凋亡

5.3抑制蛋白质合成

5.4干扰细胞信号转导

6.赭曲霉毒素A的检测方法

6.1薄层色谱法(TLC)

6.2高效液相色谱法(HPLC)

6.4酶联免疫吸附法(ELISA)

7.赭曲霉毒素A的脱毒方法

7.1物理脱毒方法

7.2化学脱毒方法

7.3生物脱毒方法

参考文献

第三章硒与酵母多糖营养调控研究进展

1.硒的研究进展

1.1硒的理化性质及其自然分布

1.2硒在动物体内的分布与代谢

1.3硒蛋白及其功能

1.4硒与机体免疫关系

1.5硒与病毒关系

2.酵母多糖研究进展

2.1酵母多糖的来源与组成

2.2酵母多糖的生物学活性

2.3酵母多糖在动物营养中的应用

参考文献

第四章赭曲霉毒素A促进PCV2复制的自噬机制研究

1.1细胞与病毒

1.2试剂与抗体

1.3 GFP-LC3质粒构建

1.5细胞内ATP含量测定

1.6 PCV2 DNA拷贝数测定

1.7 PCV2阳性感染细胞数测定

1.8 PCV2 TCID50测定

1.9 Westem blotting检测蛋白表达

1.10激光共聚焦显微镜

1.11 RNA干扰

1.12 ROS水平检测

1.13体内试验

1.14统计分析

2.试验结果

2.1 GFP-LC3真核表达载体构建与鉴定

2.2不同浓度的OTA对PK-15细胞的毒性作用

2.3不同浓度OTA对PCV2体外复制的影响

2.4 OTA处理引起PK-15细胞发生自噬反应

2.5 OTA处理诱导了完整自噬反应

2.6自噬抑制剂3-MA或CQ对OTA促进PCV2复制的影响

2.7 siRNA干扰ATG5和Beclin-1蛋白抑制自噬对OTA促进PCV2复制的影响

2.8 OTA诱导由氧化应激介导的自噬反应

2.9自噬抑制剂、sfi姆qA或NAC对PK-15细胞毒性作用

2.10体内试验

3.讨论

参考文献

第五章赭曲霉毒素A诱导自噬促进PCV2复制的信号通路机制研究

1.1细胞与病毒

1.2试剂与抗体

1.3 PCV2 DNA拷贝数测定

1.4 PCV2阳性感染细胞数测定

1.5 PCV2 TCID50测定

1.6 Western blotting检测蛋白表达

1.7统计分析

2.1 OTA处理抑制mTOR信号通路

2.2 OTA诱导的自噬和PCV2复制促进依赖于mTOR信号通路

2.3 OTA处理激活ERK1/2信号通路

2.4 OTA诱导的自噬和PCV2复制促进依赖于ERK 1/2信号通路

2.5 OTA通过激活ERK1/2信号通路抑制 mTOR

3.讨论

参考文献

第六章硒蛋氨酸阻断赭曲霉毒素A对PCV2复制促进作用的自噬机制研究

1.1细胞与病毒

1.2试剂与抗体

1.3 GFP-LC3质粒构建

1.4细胞毒性试验

1.5乳酸脱氢酶(LDH)的检测

1.6 PCV2 DNA拷贝数测定

1.7 PCV2阳性感染细胞数测定

1.8 PCV2 TCID50测定

1.9 Western blotting检测蛋白表达

1.10激光共聚焦显微镜

1.11统计分析

2.试验结果

2.1不同浓度的硒蛋氨酸对PK-15细胞的毒性作用

2.2硒蛋氨酸阻断赭曲霉毒素A对PCV2复制的促进作用

2.3硒蛋氨酸对赭曲霉毒素A诱导自噬反应的影响

2.4硒蛋氨酸对AKT/mTOR信号通路的影响

2.5雷帕霉素对硒蛋氨酸阻断赭曲霉毒素A促进PCV2复制的影响

3.讨论

参考文献

第七章酵母多糖对PCV2感染小鼠的保护作用及机制研究

1.材料与方法

1.3试验设计及动物处理

1.4样品采集与处理

1.5组织中PCV2Ⅸ擒拷贝数的测定

1.6血清中SOD活性与MDA含量的检测

1.7组织病理学切片(HE染色)

1.8免疫组化切片

1.9 Western blotting检测蛋白表达

1.10统计分析

2.试验结果

2.1 YSP对PCV2感染小鼠组织中PCV2 DNA拷贝数及免疫组化的影响

2.2 YSP对PCV2感染小鼠组织病理学变化的影响

2.3 YSP对PCV2感染小鼠抗氧化性能的影响

2.4 YSP对PCV2感染小鼠血清细胞因子IL-2和TNF-α含量的影响

2.5 YSP对PCV2感染小鼠组织中自噬水平的影响

3.讨论

参考文献

全文结论

本文创新点

致谢

攻读博士学位期间取得的科研成果

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著录项

  • 作者

    钱刚;

  • 作者单位

    南京农业大学;

  • 授予单位 南京农业大学;
  • 学科 兽医学;临床兽医学
  • 授予学位 博士
  • 导师姓名 黄克和;
  • 年度 2018
  • 页码
  • 总页数
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 TS2S81;
  • 关键词

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