水稻农林8号、农林8号m cDNA文库的构建和BSL基因的筛选

摘要

水稻农林8号m是农林8号通过<'60>CO γ射线辐射诱变获得的一个突变体.遗传分析表明:该突变性状表现为隐性单基因的遗传,在苗期能被0.05﹪以上的苯达松全部杀死,而其它常规品种则表现为对苯达松的抗性.而且,苯达松敏感致死基因对水稻的农艺性状和杂交优势没有不良的影响.将苯达松敏感致死基因转化到不育系或恢复系中,可以用于保证和提高水稻杂种纯度,革新水稻的制种方法.将约5万粒农林8号m干种子,平均分成12等分,分别用γ射线(o,200,225,250,275,300Gy六个剂量)和离子注入(0,2000,2300,2600,2900,3200六个单位剂量,每个单位剂量约2.6×10<'13>N<'+>/cm<'2>)进行诱变处理,处理后的农林8号m发苗至苗二叶期,用0.05﹪苯达松水培筛选抗性苗,未能获得使农林8号m突变基因功能恢复抗性苗,推测该突变可能不是点突变导致的.参照农林8号和农林8号m RAPD分子标记的结果,设计特异引物,通过PCR获得制备探针的DNA模板.用地高辛标记模板制作探针与农林8号cDNA文库中约30万个克隆子进行Southern原位杂交.获得了一些有杂交信号的噬菌斑,并对目的片断进行克隆和序列分析.

目录

摘要

ABSTRACT

前言

第一部分离子注入、γ射线诱导农林8号m系BSL→BSL-突变

1材料与方法

1.1水稻材料

1.2实验方法和手段

2结果与分析

2.1苯达松水培不同品种水稻苗(二叶期)存活率不同浓度苯达松对不同品种水稻苗(二叶期)致死率（见表1）

2.2不同剂量的离子注入，γ射线诱导农林8号m系BSL→BSL-基因突变（见表2）

2.3筛选

3讨论

第二部分农林8号和农林8号m cDNA文库的构建与分析

1材料与方法

1.1水稻材料

1.3实验方法

2结果与分析

2.1 RNA质量检测

2.2 mRNA质量检测

2.3重组噬菌斑的数目

3讨论

第三部分BSL基因克隆子的筛选

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验试剂

1.3实验仪器

1.4实验方法

2结果与分析

2.2目标重组子的酶切

2.3序列分析

3讨论

结论

参考文献

致谢

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