降酚菌分离、降酚基因定位及大肠杆菌表达的研究

摘要

本文从焦化废水处理厂的活性污泥中筛选高效降酚菌。选择降酚效果最好的菌株进行基因定位，提取其降解质粒将其转入大肠杆菌进行表达。取得较好的研究结果。 具体如下： 1．取活性污泥进行驯化培养，分离到5株有效菌株，通过 4-氨基安替比林直接分光光度法分析比较这5株菌降酚效果，确定其中降酚效果最好的H菌为研究对象。 2．对高效降酚菌H株进行质粒提取，结果菌具有3个质粒，且质粒片段较大最大的超过10kb，最小的2kb左右。 3．对H菌进行降酚基因的定位分析。通过SDS和原生质体再生法分别对H菌进行质粒消除，结果发现质粒去除的菌株降酚能力也随之消失。所以初步将H菌的降酚基因定位在质粒上。 4．提取H菌的质粒将其转入大肠杆菌进行表达，获得了转化子。 5．对转化子进行降酚效果测试，结果发现转化子获得了较好的降酚效果12h可达77.34％，但转化子的降解速率较小，这可能与转化子所含的质粒拷贝数有关。并证明转化子内含有与H菌株相同特性的质粒。实验得到具有降酚能力的大肠杆菌表达体系，为污染物降解的生物技术应用打下了良好基础，具有重要理论与实践意义。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：术语与略语表

声明

1综述

2、引言

3、材料和方法

3.1菌种来源

3.2实验仪器和药品

3.3挥发酚的测定方法

3.3.1试剂配制

3.3.2水样的预处理

3.3.3 4-氨基安替比林直接分光光度法

3.4降酚菌的驯化分离

3.4.1样品采集

3.4.2培养基

3.4.3降酚菌的驯化培养

3.4.4降酚菌分离、纯化

3.4.5降酚菌的降酚能力测试

3.5降酚菌的初步鉴定

3.5.1菌体形态

3.6质粒提取方法(GenExtractTM质粒小量提取试剂盒)

3.7质粒消除：

3.7.1SDS法

3.7.2原生质体再生法

3.8质粒转化：

4、结果和分析

4.1酚降解高效菌株的筛选及初步鉴定

4.2降酚菌的初步鉴定

4.3降酚菌株H的降酚基因定位分析

4.3.1 H菌质粒提取

4.3.2质粒消除法

4.3.3质粒转化与大肠杆菌表达

5、讨论

6、结论

参考文献

致谢

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