CML/CD36抑制泡沫细胞迁移加速动脉粥样硬化演进的机制研究

摘要

目的：　　探讨CML/CD36抑制泡沫细胞迁移加速动脉粥样硬化演进的作用机制。　　方法：　　（1）体内实验 apoE-/-小鼠6周龄时予腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg/day，连续5天。2周后将血糖水平≥300mg/dL的小鼠纳入本研究，分组如下：对照组（普食，n=8）、模型组（高脂饮食，n=8）、CML组（高脂饮食+尾静脉注射CML10mg/kg/day， n=8）、anti-CD36组（高脂饮食+尾静脉注射CML10mg/kg/day+尾静脉注射anti-CD36100μg/week，n=8）。连续饲喂4个月后将小鼠行安乐死，进行血清学检测（血脂血糖，血清CML水平），形态学检测（HE染色、油红O染色、免疫组化染色及免疫荧光染色）及分子生物学检测。　　（2）体外实验采用RAW264.7巨噬细胞与40μg/mL ox-LDL共孵育24h制备泡沫细胞模型，在泡沫细胞基础上进行如下研究：首先观察CML对泡沫细胞脂质蓄积和CD36表达的影响及CML与CD36的相互结合情况；其次观察CML对泡沫细胞迁移和肌动蛋白聚合的影响；继之探讨CD36在CML抑制泡沫细胞迁移中的作用；最后探讨CML/CD36影响泡沫细胞迁移的相关机制。相关研究方法包括：油红O染色、胆固醇氧化酶法、Transwell迁移实验和划痕实验、免疫共沉淀、免疫荧光染色、活性氧DCF检测法、Western blot及qRT-PCR检测等。　　结果：　　（1）HE染色提示CML组apoE?/?小鼠主动脉粥样斑块面积明显增加，胆固醇结晶聚集在纤维帽之下，而相对CML组，anti-CD36组小鼠主动脉斑块的面积明显减小，胆固醇结晶也减少。　　（2）油红O染色和胆固醇含量检测发现CML组主动脉粥样斑块可见大量脂质蓄积，总胆固醇含量明显增加；相对于CML组，anti-CD36组的脂质蓄积和总胆固醇含量减少，而在主动脉旁淋巴结内anti-CD36组脂质蓄积及胆固醇含量均增多。　　（3）免疫荧光检测和Western blot检测提示anti-CD36组主动脉粥样斑块CD68蛋白表达低于CML组，但主动脉旁淋巴结anti-CD36组CD68表达却显著高于CML组。　　（4）CML促进泡沫细胞脂质蓄积，上调泡沫细胞表面CD36表达，抑制泡沫细胞迁移，促进细胞肌动蛋白聚合。　　（6）CML/CD36抑制泡沫细胞迁移与细胞游离胆固醇、活性氧、 p-FAK、Arp2/3复合体以及F-actin的聚合有关。　　结论：　　（1）CML/CD36抑制斑块中泡沫细胞外迁至血管旁淋巴结，加速apoE?/?小鼠动脉粥样硬化的演进。　　（2）CML/CD36可能通过细胞游离胆固醇、活性氧、p-FAK、Arp2/3复合体及F-actin聚合的介导而抑制泡沫细胞迁移。

目录

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英文简写词索引

前言

技术路线图

第一部分 CML/CD36对糖尿病apoE-/-小鼠动脉粥样硬化演进的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

4 结果

5 讨论

第二部分 CML/CD36介导RAW264.7源性泡沫细胞迁移的机制

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学处理

4 结果

5 讨论

第三部分 结 论

参考文献

综述: CD36在动脉粥样硬化中的相关作用

致谢

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硕士期间参与的课题情况